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    大腸埃希氏菌計數(四)平板計數法及結果報告


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    大腸埃希氏菌平板計數法是利用大腸埃希氏菌在VRBA-MUG上顯藍白色熒光,來(lái)計數大腸埃希氏菌的,相比于MPN法,操作過(guò)程更加簡(jiǎn)單,但此種方法,不適用于貝類(lèi)。
    1、 傾注平板
    首先,取VRBA、VRBA-MUG培養基,按照標簽說(shuō)明進(jìn)行稱(chēng)量溶解,將VRBA、VRBA-MUG培養基,置于微波爐上加熱煮沸滅菌,煮沸2-3次,之后放置于45℃±0.5℃水浴鍋中備用。
    選取2個(gè)~3個(gè)適宜的連續稀釋度的樣品勻液,本次采用原液、-1、-2梯度的樣品勻液進(jìn)行實(shí)驗,每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無(wú)菌平皿,每皿1 mL。同時(shí)取1 mL稀釋液加入無(wú)菌平皿做空白對照。同時(shí)采用已知MUG陽(yáng)性菌株(如大腸埃希氏菌25922)和產(chǎn)氣腸桿菌(如ATCC 13048)做陽(yáng)性和陰性對照。
    將10 mL~15 mL冷至45℃±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)傾注于每個(gè)平皿中(注意:傾注時(shí)的溫度不能過(guò)高,否則會(huì )發(fā)生菌株死亡)。小心旋轉平皿,將培養基與樣品勻液充分混勻。(注意1:可在需傾注的平皿下方疊放一個(gè)空平皿,防止桌面太待瓊脂凝固后,再加3 mL~4 mL VRBA-MUG覆蓋平板表層,凝固后翻轉平板,36℃±1℃培養18 h~24 h。
    2、 平板菌落數的選擇
    選擇菌落數在10 CFU~100 CFU之間的平板,暗室中360 nm~366 nm波長(cháng)紫外燈照射下,計數平板上發(fā)淺藍色熒光的菌落。
    3、 大腸埃希氏菌平板計數的報告
    兩個(gè)平板上發(fā)熒光菌落數的平均數乘以稀釋倍數,報告每g(mL)樣品中大腸埃希氏菌,以CFU/g(mL)表示。若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(cháng),則以小于1乘以最低稀釋倍數報告。

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