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    沙門(mén)氏菌檢驗(四)血清學(xué)鑒定實(shí)驗


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    本視頻僅包含多價(jià)菌體抗原(O)鑒定和多價(jià)鞭毛抗原(H)鑒定,不含血清學(xué)分型。 將生化鑒定實(shí)驗中,明確指出要求血清學(xué)鑒定結果的疑似菌株,采用1.2%-1.5%瓊脂培養基(TSA瓊脂即可)進(jìn)行培養,制成試驗用的抗原。
    首先對其進(jìn)行自凝性檢查,在潔凈的載玻片上滴加一滴生理鹽水,將待試培養物混合于生理鹽水滴內,使之成為均一性的混濁懸液,將玻片輕輕搖動(dòng)30s-60s后,在黑色背景下觀(guān)察反應結果(必要時(shí)可用放大鏡觀(guān)察),若出現可見(jiàn)的菌體凝集,即認為其有自凝性,反之無(wú)自凝性。
    待試菌株判定為無(wú)自凝性后,方可進(jìn)行多價(jià)菌體抗原(O)鑒定和多價(jià)鞭毛抗原(H)鑒定。
    在潔凈玻片上分出2個(gè)約1 cm-2 cm的區域,挑取1環(huán)待測菌,各放1/2環(huán)于劃分的每一區域上部,然后在其中一個(gè)區域下部加1滴多價(jià)菌體(O)抗血清或多價(jià)鞭毛(H)抗血清,在另一區域下部加入1滴生理鹽水作為反應對照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè )謩e將兩個(gè)區域內的菌苔研成乳狀液。將玻片傾斜搖動(dòng)混合1 min,并對著(zhù)黑暗背景進(jìn)行觀(guān)察。
    出現任何程度的凝集現象皆為陽(yáng)性反應,不產(chǎn)生凝集呈均勻渾濁態(tài)為陰性反應。
    根據多價(jià)菌體抗原(O)和多價(jià)鞭毛抗原(H)的鑒定結果,進(jìn)行沙門(mén)氏菌判定。
    注意事項:
    (1)若在進(jìn)行多價(jià)菌體抗原(O)鑒定時(shí),O血清不凝集,需將菌株接種在瓊脂量較高的(如2%-3%)培養基上(可自行加入瓊脂進(jìn)行配制)再檢查一遍。
    如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反應時(shí),可挑取菌苔于1 mL生理鹽水中做成濃菌液,于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。
    (2)若在進(jìn)行多價(jià)鞭毛抗原(H)鑒定時(shí),H血清不凝集,需將菌株接種在0.55%-0.65%半固體瓊脂平板的中央(本試驗使用TSA平板),待菌落蔓延生長(cháng)時(shí),在其邊緣部分取菌檢查。

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