嗜熱需氧芽孢

指在有氧條件下，經(jīng)100℃加熱處理30min，能存活并且于55℃下培養48h在DTA平板上形成可計數菌落的微生物。

1、稱(chēng)取培養基6.0g溶解于含有200ml去離子水的錐形瓶中，121℃15min高溫高壓滅菌，備用。

2、挑取適量的嗜熱芽孢桿菌于10ml無(wú)菌生理鹽水中，制成菌懸液。

3、立即將試管放入100℃的水浴中，使試管內液面至少低于水面4cm。

4、加熱處理30±1min，從試管放入100℃水浴中開(kāi)始計時(shí)。

5、將加熱處理后的試管取出立即放到20℃以下的流水中冷卻。

6、將冷卻后的菌懸液進(jìn)行梯度稀釋。

7、選擇適宜的2-3個(gè)梯度，吸取1ml稀釋液至無(wú)菌空平皿中，每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)平皿，立即傾注12-15ml冷卻至45℃左右DTA培養基，小心轉動(dòng)平皿使稀釋液與培養基混合均勻，水平放置使混合物凝固。（從熱處理結束到稀釋液與培養基混合所用時(shí)間不得超過(guò)15min。）

8、接種樣液的同時(shí)，用1ml稀釋液，做空白試驗。

9、待瓊脂凝固后，堆疊平皿，將其倒置在塑料袋中，放入培養箱，55±1℃培養48±2h。

10、保留含有10-150個(gè)菌落的培養皿進(jìn)行菌落計數。