一、樣品的稀釋

  1.固體和半固體樣品：稱(chēng)取25 g樣品，加入225 mL無(wú)菌稀釋液（注：無(wú)菌稀釋液可使用蒸餾水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖液），充分振搖（注：還可使用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min~2 min），制成1:10的樣品勻液。

  2.液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25 mL樣品至盛有225 mL無(wú)菌稀釋液的適宜容器內或無(wú)菌均質(zhì)袋內，為使樣品更為均勻，可在瓶?jì)阮A置適當數量的無(wú)菌玻璃珠，混勻操作同固體樣品一致。

  3-4.取1 mL 1:10樣品勻液注入含有9 mL無(wú)菌稀釋液的試管中，另?yè)Q一支1 mL無(wú)菌吸管反復吹吸，或在旋渦混合器上混勻，此液為1:100的樣品勻液。按此操作可繼續制備10倍遞增稀釋濃度的樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1支1 mL無(wú)菌吸管。

  5.根據對樣品污染狀況的估計，選擇2-3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（注：液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液于2個(gè)無(wú)菌平皿中。同時(shí)分別取1 mL無(wú)菌稀釋液加入2個(gè)無(wú)菌平皿作空白對照。

  6.及時(shí)將冷卻至46℃的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂（注：培養基可放置46℃±1℃恒溫水浴鍋中保溫）傾注平皿，每個(gè)平皿20~25 mL，轉動(dòng)平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養基完全凝固。

二、培養

  瓊脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培養箱中培養，觀(guān)察并記錄培養至第5天的結果。 補充：展示黑曲霉、酵母菌分別在馬鈴薯葡萄糖瓊脂、孟加拉紅瓊脂平板上的菌落狀態(tài)。本次試驗以固體樣品接種于孟加拉紅瓊脂平板為例計數。

三、菌落計數

  肉眼觀(guān)察，必要時(shí)可用放大鏡或低倍鏡，記錄稀釋倍數和相應的霉菌和酵母菌落數。以菌落形成單位（CFU）表示。 選取菌落數在10 CFU-150 CFU的平板，根據菌落形態(tài)分別計數霉菌和酵母。霉菌蔓延生長(cháng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延。

四、結果與報告

  1.計算同一稀釋度的兩個(gè)平板菌落數的平均值，以孟加拉紅瓊脂結果為例，1:10平均菌數為24，再將平均值乘以相應稀釋倍數，為24*10=240。注：滿(mǎn)足以下其它條件的按具體說(shuō)明計數。

  2.報告 稱(chēng)重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告或分別報告霉菌和/或酵母數。本次試驗報告樣品含黑曲霉菌數為240 CFU/g。