樣品制備

固體和半固體樣品以無(wú)菌操作稱(chēng)取25 g，液體樣品應先將其充分搖勻后以無(wú)菌吸管吸取25 mL，置于裝有225 mL稀釋液的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min~2 min，制成1:10的樣品勻液。

注：1.冷凍樣品：可先使其在2℃~5℃條件下解凍，時(shí)間不超過(guò)18 h，也可在溫度不超過(guò)45℃的條件下解凍，時(shí)間不超過(guò)15 min。

  2.稀釋液在試驗前應在36℃±1℃條件下充分預熱15 min~30 min；

  3.經(jīng)特殊技術(shù)（如包埋技術(shù)）處理的含乳酸菌食品樣品應在相應技術(shù)/工藝要求下進(jìn)行有效前處理。

  4.樣品的全部制備過(guò)程均應遵循無(wú)菌操作程序。

樣品稀釋

1.用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL稀釋液的無(wú)菌試管中，振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。

2.另取1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，每遞增稀釋一次，即換用1次l mL滅菌吸管或吸頭。

注：1.注意吸管或微量移液器吸頭尖端不要觸及稀釋液

  2.經(jīng)特殊技術(shù)（如包埋技術(shù)）處理的含乳酸菌食品應按照相應技術(shù)/工藝要求進(jìn)行稀釋。

樣品計數

本標準中，主要涉及了3種乳酸菌，分別為乳桿菌屬、雙歧桿菌屬和嗜熱鏈球菌。由于3種乳酸菌的培養條件和特征各有不同，要檢驗出樣品中乳酸菌的總數，就需要根據菌種的不同選擇使用合適的培養基，對結果進(jìn)行計數。

以乳桿菌計數為例

  1.根據待檢樣品活菌總數的估計，選擇2個(gè)~3個(gè)連續的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取1 mL樣品勻液于滅菌平皿內，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。

  2.稀釋液移入平皿后，將冷卻至48℃~50℃的MRS瓊脂培養基傾注入平皿15 mL~20 mL，轉動(dòng)平皿使混合均勻。

  3.培養基凝固后倒置于36℃±1℃厭氧培養，根據乳桿菌生長(cháng)特性，一般選擇培養48 h，若菌落無(wú)生長(cháng)或生長(cháng)較小可選擇培養至72 h。

  注：從樣品稀釋到平板傾注要求在15 min內完成。