一、樣品稀釋
1.固體和半固體樣品：稱(chēng)取25 g樣品，放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)杯內， 8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1 min～2 min，制成1:10樣品勻液，或放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌均質(zhì)袋（HBJ001含225ml磷酸鹽緩沖液均質(zhì)袋）中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min制成1:10的樣品勻液。
2.液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jì)阮A置適當數量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。
注意：樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時(shí)分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCl調節。
3.用1 mL無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL磷酸鹽緩沖液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1 mL無(wú)菌吸管或吸頭反復吹打，使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。
二、初發(fā)酵試驗
每個(gè)樣品，選擇3個(gè)適宜的連續稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個(gè)稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）肉湯每管接種1 mL（如接種量超過(guò)1 mL，則用雙料LST肉湯），36℃±1℃培養24 h±2 h。
三、結果觀(guān)察
觀(guān)察小倒管內是否有氣泡產(chǎn)生，24 h±2 h產(chǎn)氣者進(jìn)行復發(fā)酵試驗，如未產(chǎn)氣則繼續培養48 h±2 h。產(chǎn)氣者進(jìn)行復發(fā)酵試驗。