雞毒支原體培養基基礎

1.培養基的配制及物品的準備
配制海博雞毒支原體培養基基礎于錐形瓶中，取空試管、膠塞、0.22μm濾頭、移液槍頭、裝有10 mL蒸餾水的錐形瓶、碳酸鈉溶液包好。培養基于116℃滅菌鍋中滅菌30分鐘。其它物品于121℃的滅菌鍋中滅菌15分鐘。(注意：試管與膠塞要分開(kāi)包裝滅菌，塞好塞子的試管直接滅菌可能會(huì )出現滅菌不徹底的現象，增加了污染的風(fēng)險)。
2.添加血清及添加劑
滅菌結束后，待培養基冷卻至室溫后，向培養基中添加馬血清及添加劑。添加劑可使用海博雞毒支原體培養基基礎配套添加劑（HBYM329-1a）或自己配制。添加劑的配制方法為：稱(chēng)取輔酶I 0.1 g、L-半胱氨酸0.1 g、精氨酸0.4 g添加至10 mL無(wú)菌水中配制成濃度分別為0.01 g/mL、0.01 g/mL、0.04 g/mL的母液，混合均勻后，使用無(wú)菌注射器吸取溶液經(jīng)0.22μm濾頭進(jìn)行過(guò)濾除菌，之后每100 mL培養基中添加1 mL的添加劑母液。將培養基分裝至試管中。
3.調節pH
接種雞毒支原體前需先將培養基pH至7.6~7.8，用ph儀，測試培養基的ph為7.54，可添加適量的碳酸鈉至培養基中，使培養基ph在7.6~7.8之間。本次確定碳酸鈉平均添加量為10 μL。向每支試驗用試管中添加10 μL碳酸鈉并震蕩均勻。（注意：均使用滅菌后的碳酸鈉以避免誤差）。
4.接種雞毒支原體
接種雞毒支原體于培養基中混合均勻記為-1，并做梯度稀釋至-9，設兩支未接種的培養基為陰性對照管。使用封口膜封口，之后放置于36℃±1℃的培養箱中培養5-7天。
5.結果觀(guān)察
培養第5天，靈敏度為9。