本次培養基使用疫苗專(zhuān)用BHI為例

1.制備固體平板

  ①準備工作：取BHI疫苗專(zhuān)用培養基肉湯，按10 g（瓊脂）/L（水+馬血清）用量添加瓊脂。滅菌結束后，為防止培養基過(guò)熱致使添加血清后使血清變質(zhì)，添加血清前將培養基冷卻至50℃左右。為防止血清過(guò)冷致使培養基凝固，添加血清前將血清預熱至37℃。血清一般在冰箱冷凍保存，取出后需預熱至37℃后使用

  ②添加抑菌劑：抑菌劑使用青霉素鈉，青霉素鈉用量為80萬(wàn)IU/L（900 mL水+100 mL馬血清），青霉素鈉溶液貨號為HB7025-2a。

  ③添加血清及制備平板：添加血清且搖勻后，此時(shí)會(huì )產(chǎn)生大量泡沫，若直接倒板平板表面會(huì )布滿(mǎn)氣泡，嚴重干擾試驗結果的觀(guān)察，使用移液槍?zhuān)?0 mL滅菌后的槍頭）每板吸加20 mL，此后，風(fēng)吹15分鐘，備用。

2.菌液梯度稀釋

  使用BHI疫苗專(zhuān)用培養基肉湯作為稀釋液，將人肺炎支原體原液梯度稀釋至10-3。

3.涂布接種

  吸取100 μL菌液（原液~10-3共4個(gè)濃度）涂布至固體平板，接100 μL BHI肉湯至平板作為陰性對照，使用封口膜對平板封口，平行組數為3。

4.培養

  放置于36℃培養箱中培養21天。

5.結果觀(guān)察 

  取平板觀(guān)察，平板由橙紅（陰性對照）變黃（陽(yáng)性），且在光線(xiàn)下可見(jiàn)平板表面有微小菌落，初步判定陽(yáng)性結果。將平板放置于低倍鏡下觀(guān)察，可見(jiàn)煎雞蛋狀菌落，核心部分較厚，向下長(cháng)入培養基，周邊一層薄的透明顆粒區，可判定陽(yáng)性結果。

6.補充-染色鏡檢

  為增加顏色對比度，可采用染色鏡檢。將結晶紫染液稀釋10倍左右，直接加入到平板上染色10秒，可不用水沖洗，將平板放置于顯微鏡下觀(guān)察。（注：染色結束后，若用水沖洗可能會(huì )將菌落沖掉，這與菌落在平板表面的附著(zhù)力有關(guān)）