0.5%堿性復紅溶液

什么是蛋白質(zhì)毒素結晶試驗：
在GB4789.14標準中，在進(jìn)行蠟樣芽胞桿菌鑒定時(shí)蠟樣芽胞桿菌與蘇云金芽孢桿菌生化反應相同，但蘇云金芽孢桿菌在形成芽孢的同時(shí)，會(huì )在芽孢旁形成一顆菱形、方形或不規則形的堿溶性蛋白質(zhì)晶體，稱(chēng)為伴孢晶體，該晶體易被堿性染料著(zhù)色，因此常用0.5%堿性復紅染料進(jìn)行染色觀(guān)察。而蠟樣芽胞桿菌和其他芽孢桿菌不產(chǎn)生伴孢晶體。這個(gè)染色實(shí)驗就是蛋白質(zhì)毒素結晶試驗。

操作步驟：

培養芽孢：將待測菌株接種至硫酸錳營(yíng)養瓊脂平板，30±1℃培養24±2h，并于室溫放置3-4天。若芽孢產(chǎn)生不豐富，可在室溫繼續放置2-3天后觀(guān)察。
原理：芽孢桿菌在營(yíng)養條件缺乏時(shí)，開(kāi)始形成芽孢，因此在進(jìn)行細菌產(chǎn)芽孢相關(guān)試驗時(shí)，通常需進(jìn)行5-7天的放置或培養，待培養基內營(yíng)養耗盡，可獲得更豐富的芽孢。
制片染色：挑取培養物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用 30 s 后傾去，再通過(guò)火焰干燥，于載玻片上滴滿(mǎn) 0.5%堿性復紅，放火焰上加熱（微見(jiàn)蒸氣，勿使染液沸騰)持續 1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色 30 s，傾去染液用潔凈自來(lái)水徹底清洗、晾干后鏡檢。觀(guān)察有無(wú)游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形蛋白結晶體。
（注：在菌苔生長(cháng)密集的地方營(yíng)養消耗更快，更容易產(chǎn)生芽孢，因此挑取密集生長(cháng)處的菌苔制片易觀(guān)察到更多芽孢）