首先，進(jìn)行三糖鐵試驗和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗。
煮沸三糖鐵瓊脂培養基2-3次，分裝試管后于121℃高壓滅菌鍋中滅菌15分鐘，此后制成高層斜面，斜面與底層比例為2：3。（注意：若培養基滅菌前不煮沸會(huì )造成瓊脂溶解不完全，在制備斜面時(shí)會(huì )出現不凝固或凝固不完全的現象。）
自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落（示例BS平板上有兩種疑似菌落），接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線(xiàn)，再于底層穿刺（注意若先穿刺再劃線(xiàn)可能會(huì )導致含菌量太高，干擾結果判別）；
接種針不要滅菌，直接接種賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基（同時(shí)做氨基酸脫羧酶對照試驗，均加滅菌石蠟覆蓋培養基液面）和營(yíng)養瓊脂平板，于36℃±1℃培養18 h~24 h，必要時(shí)可延長(cháng)至48 h。本管變紫色，對照管變黃色，為陽(yáng)性；本管與對照管均變黃色為陰性。
三糖鐵試驗現象觀(guān)察：若為黃色，則為產(chǎn)酸，記為A；若為紅色，則為產(chǎn)堿，記為K；若底層變黑，則為硫化氫陽(yáng)性；若出現氣泡或斷層，則為產(chǎn)氣陽(yáng)性。在三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗培養基內，沙門(mén)氏菌屬的反應結果見(jiàn)表2�？芍狟S平板上的兩種（菌1和菌2）菌株均為可疑沙門(mén)氏菌屬。

之后，進(jìn)行靛基質(zhì)試驗、尿素酶試驗、氰化鉀試驗
從營(yíng)養瓊脂平板上挑取單個(gè)菌落至無(wú)菌生理鹽水中，混勻細菌懸液，每個(gè)生化管加入100 μL菌懸液。于36 ℃±1 ℃培養18 h~24 h，必要時(shí)可延長(cháng)至48h，注意蛋白胨水試驗結果觀(guān)察前需加Kovacs氏靛基質(zhì)試劑2-3滴，有紅色環(huán)為陽(yáng)性，不變色或黃色為陰性；尿素瓊脂紅色為陽(yáng)性，不變色或黃色為陰性；進(jìn)行氰化鉀試驗的同時(shí)需做氰化鉀試驗對照，氰化鉀對照生長(cháng)，溶液變渾濁時(shí)，氰化鉀不生長(cháng)為陰性，生長(cháng)為陽(yáng)性。
之后按表3判定結果。將已挑菌落的平板儲存 于2 ℃~5 ℃或室溫至少保留24h，以備必要時(shí)復查。

由表3可知，菌1表現為A1序號且無(wú)異常項，因此判定為沙門(mén)氏菌屬，如尿素、KCN 和賴(lài)氨酸脫羧酶3項中有1項異 常，按表4可判定為沙門(mén)氏菌。如有2項異常為非沙門(mén)氏菌。

菌2表現為A3序號，需補做ONPG。ONPG黃色或深黃色為陽(yáng)性，無(wú)色為陰性。ONPG陰性為沙門(mén)氏菌，同時(shí)賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，甲型副傷寒沙門(mén)氏菌為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性。由于菌2為ONPG陰性且為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性，因此為甲型副傷寒沙門(mén)氏菌。
此外，若疑似菌株表現為A2序號，需補做甘露醇和山梨醇試驗，沙門(mén)氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項試驗結果均為陽(yáng)性，但需要結合血清學(xué)鑒定結果進(jìn)行判定。