雙抗巧克力瓊脂培養基

雙抗巧克力瓊脂培養基用于嗜血桿菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養，需要加入脫纖維羊血和萬(wàn)古霉素，多粘菌素B進(jìn)行制備。
1.按照產(chǎn)品標簽說(shuō)明，稱(chēng)取8.8 g雙抗巧克力瓊脂干粉。
2.倒入盛有200 mL純化水的搪瓷缸中，然后用玻璃棒不停攪拌，直到干粉完全溶解。
3.之后將搪瓷缸放置于電磁爐上，一邊加熱，一邊攪拌，當液面完全沸騰后，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開(kāi)，為第一次煮沸，當液面回落后立即放回電磁爐加熱，重復加熱煮沸，共煮沸2-3次，之后倒入三角瓶中，包好。
4.放置于高壓滅菌鍋中，121℃滅菌15分鐘。
5.滅菌結束后，取出培養基，待培養基冷至50℃左右時(shí)，用移液槍吸取14 mL無(wú)菌脫纖維羊血（添加量為7%），緩慢加入三角瓶中，不斷搖晃使其與培養基充分混勻；將三角瓶放置于80℃水浴中加熱10 min左右，不停搖動(dòng)，直至培養基顏色變成棕色（巧克力色）。
6.待培養基冷至45℃-50℃時(shí)，用移液槍吸取一支雙抗巧克力瓊脂添加劑（含萬(wàn)古霉素0.66 mg，多粘菌素B 0.84 mg），緩慢加入三角瓶中，并不斷搖晃使其與培養基充分混勻，傾入無(wú)菌平皿，備用。
7.配制好的雙抗巧克力平板應為巧克力色固體，表面平整。
檢驗原理
雙抗巧克力瓊脂培養基用于嗜血桿菌和奈瑟氏菌等苛養菌的培養，各種消化物和酵母浸出粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子；淀粉能促進(jìn)奈瑟氏菌的生長(cháng)；氯化鈉維持均衡的滲透壓；多粘菌素、萬(wàn)古霉素抑制了革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng)，更有利于嗜血桿菌和奈瑟氏菌的生長(cháng)；瓊脂是培養基的凝固劑；脫纖維羊血提供氯化血紅素和輔酶I，血液中還含有V、X因子，這兩種因子是位于紅細胞中的，一般細菌不能利用，輕微的加熱（一般為75℃~85℃左右）使紅細胞破壞釋放出V、X因子。
注意事項
1.無(wú)菌脫纖維羊血必須提前從冰箱中取出，待其恢復至室溫后使用。
2.加入羊血和抗生素時(shí)需注意不斷搖晃三角瓶，使其與培養基充分混勻。
3.80℃水浴中加熱后可以不加雙抗巧克力瓊脂添加劑（含萬(wàn)古霉素0.66 mg，多粘菌素B 0.84 mg），直接倒平板，即為巧克力瓊脂平板，也可用于培養苛養菌。