操作視頻 | 肺炎支原體的靈敏度試驗方法
用途:用于支原體的分離培養。
添加劑:每瓶支原體肉湯培養基需配套2盒HB7025-2a青霉素溶液(80萬(wàn)IU)。每1000ml支原體肉湯培養基溶液中添加1支HB7025-2a青霉素溶液(80萬(wàn)IU)。
支原體簡(jiǎn)介
支原體結構簡(jiǎn)單,缺乏細胞壁,僅有質(zhì)膜,胞體內有核蛋白體以及一個(gè)由環(huán)形雙鏈DNA分子組成的原核。大小僅有0.1~0.3μm,最小直徑約為100毫微米,可通過(guò)濾菌器,會(huì )干擾細胞培養等工作的進(jìn)行。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱(chēng)為支原體。
不同支原體利用的能源物質(zhì)不同,如發(fā)酵葡萄糖的肺炎支原體、人型支原體等,水解精氨酸的口腔支原體等,還有利用尿素作為能源的解脲支原體?衫冒l(fā)酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反應鑒別支原體。
支原體營(yíng)養要求一般比細菌高,除必須的基礎營(yíng)養物質(zhì)外,還需添加10%~20%的動(dòng)物血清以提供支原體所需的膽固醇。由于大多數的支原體兼性厭氧,有些菌株在活化分離時(shí)保持5%~10%二氧化碳環(huán)境生長(cháng)狀態(tài)更好。解脲支原體在厭氧條件下生長(cháng)更好。
支原體無(wú)細胞壁,對滲透壓敏感,對抑制細胞壁合成的抗生素不敏感,因此可添加青霉素抑制細菌的生長(cháng)。由于滲透壓突變會(huì )導致支原體破裂死亡,因此培養支原體時(shí),維持適宜的滲透壓顯得格外重要。此外,在支原體培養中,pH也是重要因素。
肺炎支原體檢驗依據及培養基原理
支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國藥典》中體現,要求使用支原體肉湯培養基培養監測肺炎支原體。具體操作要求為:將肺炎支原體稀釋至10-7~10-9,接種在支原體肉湯培養基中,每個(gè)稀釋度接種3支試管,置于36℃培養7-14天,觀(guān)察培養基變色結果。肺炎支原體可以發(fā)酵培養基中的葡萄糖,使培養基的pH值降低,遇指示劑酚紅使培養基變黃。
豬胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子;葡萄糖為可發(fā)酵的糖類(lèi);氯化鈉維持滲透壓;酚紅為指示劑。
成分(g/L) 豬胃消化物 10.0 牛肉浸粉 5.0 酵母浸粉 5.0 氯化鈉 2.5 葡萄糖 5.0 酚紅 0.02 pH值7.6±0.2 25℃
用法
稱(chēng)取本品 27.52g,加熱溶解于 800ml 蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至室溫,無(wú)菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和青霉素 80 萬(wàn)單位,混勻,分裝無(wú)菌試管,備用。
支原體肉湯培養肺炎支原體12天的靈敏度
支原體肉湯培養基微生物靈敏度試驗:
按標簽用法制備培養基,接種以下質(zhì)控菌株,放置36±1℃需氧培養7-14天。
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