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一、支原體簡(jiǎn)介
支原體結構簡(jiǎn)單，缺乏細胞壁，僅有質(zhì)膜，胞體內有核蛋白體以及一個(gè)由環(huán)形雙鏈DNA分子組成的原核。大小僅有0.1~0.3μm，最小直徑約為100毫微米，可通過(guò)濾菌器，會(huì )干擾細胞培養等工作的進(jìn)行。由于能形成絲狀與分枝形狀，故稱(chēng)為支原體。
不同支原體利用的能源物質(zhì)不同，如發(fā)酵葡萄糖的肺炎支原體、人型支原體等，水解精氨酸的口腔支原體等，還有利用尿素作為能源的解脲支原體�？衫冒l(fā)酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反應鑒別支原體。
支原體營(yíng)養要求一般比細菌高，除必須的基礎營(yíng)養物質(zhì)外，還需添加10%~20%的動(dòng)物血清以提供支原體所需的膽固醇。由于大多數的支原體兼性厭氧，有些菌株在活化分離時(shí)保持5%~10%二氧化碳環(huán)境生長(cháng)狀態(tài)更好。解脲支原體在厭氧條件下生長(cháng)更好。
支原體無(wú)細胞壁，對滲透壓敏感，對抑制細胞壁合成的抗生素不敏感，因此可添加青霉素抑制細菌的生長(cháng)。由于滲透壓突變會(huì )導致支原體破裂死亡，因此培養支原體時(shí)，維持適宜的滲透壓顯得格外重要。此外，在支原體培養中，pH也是重要因素。
二、肺炎支原體檢驗依據及培養基原理
支原體檢查法在2020年版《中華人民共和國藥典》中體現，要求使用支原體肉湯培養基培養監測肺炎支原體。具體操作要求為：將肺炎支原體稀釋至10-7~10-9，接種在支原體肉湯培養基中，每個(gè)稀釋度接種3支試管，置于36℃培養7-14天，觀(guān)察培養基變色結果。肺炎支原體可以發(fā)酵培養基中的葡萄糖，使培養基的pH值降低，遇指示劑酚紅使培養基變黃。
豬胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源、維生素和生長(cháng)因子；葡萄糖為可發(fā)酵的糖類(lèi)；氯化鈉維持滲透壓；酚紅為指示劑。
三、培養基配方（g/L）
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豬胃消化粉 |
10.0 |
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牛肉浸粉 |
5.0 |
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酵母浸粉 |
5.0 |
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氯化鈉 |
2.5 |
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葡萄糖 |
5.0 |
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酚紅 |
0.02 |
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pH 7.6±0.2（25℃） |
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四、試驗方法
1、稱(chēng)取本品27.52g，加熱溶解于800mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15分鐘，冷至室溫，無(wú)菌操作加入滅活小牛血清或馬血清200mL和青霉素80萬(wàn)單位，混勻，分裝無(wú)菌試管，備用。
2、制備質(zhì)控菌株，接種到培養基中，并梯度稀釋至-9，并做空白對照。
3、放置于36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養7-14天。
五、試驗注意事項
1、若使用非一次性試管等容器進(jìn)行試驗，容器使用前應使用蒸餾水沖洗干凈，確保無(wú)洗滌液等殘留物，以免增加試驗的不確定性或污染。
2、滅菌結束后，試管口會(huì )有水珠，在進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，水珠很容易與空氣中的細菌接觸以致污染，因此，試管口應灼燒至干燥，膠塞也需過(guò)火，振蕩操作后，若培養基接觸到膠塞，還需再次進(jìn)行灼燒管口。
3、調節pH時(shí)，使用的酸堿試劑均應是滅菌后的。
4、支原體培養前應使用封口膜封口，可提供微需氧環(huán)境以及降低污染的風(fēng)險。
六、質(zhì)控結果
接種以下質(zhì)控菌株，放置于36℃±1℃恒溫培養箱中，需氧培養7~14天。培養至12天的試驗結果如圖1所示。
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
接種量（CFU） |
生長(cháng)情況 |
其它特征 |
|
肺炎支原體 |
ATCC 15531 |
/ |
+++ |
10（-9）稀釋度變黃色 |
圖1 支原體肉湯培養肺炎支原體12天的靈敏度
相關(guān)產(chǎn)品：
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
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