朊病毒的檢測（下）
錄入時(shí)間:2012-7-16 8:50:48
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3 借助特殊儀器的檢測方法
(1)電鏡法：電鏡檢測瘙癢病相關(guān)纖維(SAF)是朊病毒檢測的另外一種方法�，F在認為PrPsc是SAF的組成成分。瘙癢病相關(guān)纖維為桿狀、纖維狀結構，其實(shí)是PrPsc在用去垢劑提取過(guò)程中，不同提取條件下形成的產(chǎn)物，感染生物體的組織切片中尚未發(fā)現SAF�；静襟E是：將被檢組織置于10％N-laruoylsarcosine溶液中勻漿，差速離心、PK消化，重懸于蒸餾水中，負染，電鏡觀(guān)察。鏡下可見(jiàn)兩種瘙癢病特有的大分子纖維。電鏡檢查SAF靈敏度較低，不如免疫印跡方法。
(2)毛細管SDS-凝膠電泳：該法主要是通過(guò)理化方法--差速、超速離心，sodium N-lauroylsarcosine、PK處理，提純PrPsc，然后在 Beckman P/ACE 5 500上進(jìn)行毛細管SDS-凝膠電泳。根據各組分通過(guò)檢測器時(shí)，在214 nm波長(cháng)處產(chǎn)生吸收峰的時(shí)間和峰形，鑒別出瘙癢病病原因子PrPsc。該法標本用量少，無(wú)需免疫學(xué)試劑，判斷直觀(guān)；缺點(diǎn)是需用超速離心機、專(zhuān)用毛細管電泳儀。
(3)熒光標記肽鏈的毛細管電泳免疫測定法：該法是根據免疫競爭原理測定，采用無(wú)區帶毛細管電泳技術(shù)結合免疫熒光技術(shù)，檢測標本中微量的PrPse。其基本原理是將人工合成PrPsc特異性肽鏈(142～154)標記上熒光，然后與一定量的特異性抗體、羊腦提取物一起電泳，熒光標記的肽鏈與抗體結合后，遷移率發(fā)生改變，從而與游離的標記肽鏈分離開(kāi)來(lái)，由于抗體的量只能結合大約50％的標記肽鏈，因而熒光標記的結合型肽鏈與游離型標記肽鏈的比例是固定的。當羊腦提取物中存在微量的PrPsc，由于其與標記肽鏈競爭結合抗體，導致結合型肽鏈與游離型肽鏈的比例發(fā)生改變，從而被儀器檢測出來(lái)。該方法靈敏度很高，能檢測到135 pg的PrPsc，可用于檢測朊病毒水平很低的腦外組織(如血液等)。
(4)雙色強熒光目標掃描法：該法是運用共聚焦雙色熒光相關(guān)分光鏡技術(shù)檢測極其微量的朊病毒。其基本原理是利用致病性 PrPres，在適當條件下自我復制和自發(fā)聚集的特點(diǎn)，將重組PrP(rPrP)標記上綠色熒光，PrPres與正常構象的rPrP結合后，通過(guò)變構復制出大量的異常構象的rPrP蓋。由于PrPres在一定條件下可自發(fā)聚集，從而使PrPres周?chē)奂舜罅康膔PrP蓋，使其熒光強度超過(guò)游離的rPrP50倍。同時(shí)為了增強實(shí)驗的特異性，又加入了標記上紅色熒光的特異性單抗，使PrPres- rPrP蓋聚集體又標記上紅色熒光。只有同時(shí)發(fā)出高強度紅、綠熒光的顆粒，才能被檢測儀器判為PrPres。
目前，朊病毒領(lǐng)域的許多方面對人類(lèi)來(lái)說(shuō)還有一片空白或知之甚少，如朊病毒突破種屬屏障傳播的程度，通過(guò)生物制品和臨床醫療傳播的危險性，其他傳播途徑的探知，以及朊病毒致病機制的研究等等，諸多方面的問(wèn)題都離不開(kāi)朊病毒的檢測，朊病毒檢測方法的發(fā)展必將為朊病毒的研究開(kāi)辟廣泛的前景。
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