組織培養中污染及防止（下）

四、針對污染源常使用的防治方法

A. 種類(lèi)

1. 熱療－對病毒較有效但須花費時(shí)間。處理時(shí)，需6-12星期在30-40℃。

2. 冷療法－亦對病毒有效。

3. 利用抗生素。

4. 以分生組織，不帶病毒等污染源。

5. 利用培養基中高糖，高鹽的濃度。

6. 利用抗并毒藥物。

7. 營(yíng)養需求不同。

8. 利用水。

9. 抽樣檢測。

B. 防治方法之效果討論

1. 熱療法及冷療法

對病毒有效，但須花時(shí)間處理，例如：熱療法處理時(shí)間需花6-12星期在30-40℃。

2. 利用抗生素

這是目前較常用的方法，但是在抗生素加入培養基，其有效濃度常因植物具有半滲透功能，而使濃度無(wú)法達到有效濃度。使用抗生素時(shí)，需注意下列事項：

（1）要知道抑制的微生物為何，再使用抗生素，及對癥下藥。

（2）要決定最小抑制濃度，以降低成本。

（3）要確定抗生素不會(huì )對植物造成并害或突變。

（4）確定抗生素在培養基上是否有作用。

（5）使用時(shí)，常因需要而多種混合或交替使用。

（6）有些抗生素在某些國家是禁止使用，使用前必須做詢(xún)問(wèn)此藥劑是否合法使用。

使用抗生素的缺點(diǎn)

（1）可能對哺乳類(lèi)動(dòng)物有害。

（2）若是使用生長(cháng)期較長(cháng)的植物，微生物亦有抗藥性產(chǎn)生。

（3）容易錯誤使用：沒(méi)有針對微生物而使用各種不同的抗生素。

抗生素的種類(lèi) 對象

抑制細胞壁合成

Bactracin G(+)，殺菌，對抗β-lactams的菌有作用

β-lactams G(+)，殺菌，若用10-100倍，則對G(-)有效

Glycopeptides G(+)，殺菌，但恨貴，不易有抗藥性

抑制膜的形成

plymixins 對G(-)Psedomonas spp.有效

抑制蛋白質(zhì)的合成

Ghloramphrnical 殺菌作用，便宜，但對植物有毒害作用

Aminoglycosides 使用對象廣泛，對植物有毒害作用，在堿性環(huán)境下較有活性可針對G(-)可和盤(pán)尼西林(pencillins)一起作用

Macrolides and 對G(+)有靜菌作用

Lincosamides

Tetracyclines 為靜菌作用，對G(+)、G(-)都可以會(huì )刺激酵母菌，植物有害對

核酸抑制物質(zhì)

Qutnolnes 殺菌，對 G(+)有效，10-100倍濃度則對G(-)有效，有抗藥性產(chǎn)生，可引起過(guò)敏反應易

Rifampicin 殺菌，對一些G(+)或G(-)的細菌有作用，但常有抗藥性產(chǎn)生

Trimethoprim 對于一些 G(+)或G(-)的細菌有作用，Trimethoprim

Sulphonamides Sulphonamides兩種混合使用有加強的作用

Sulphonamides在堿性環(huán)境下較活躍

3. 分生組織法

主要是針對在植物內部寄主的菌類(lèi)，如病毒等。因其生長(cháng)速度無(wú)法長(cháng)到頂芽的分生組織，所以在頂芽的分生組織則無(wú)病原菌存在�？梢岳�用此分生組織培養成植株即可避免感染問(wèn)題。

4. 利用培養基中高鹽或高糖的濃度

在培養基中有一些高鹽或高糖的濃度可抑制微生物生長(cháng)，或有單寧酸的存在時(shí)也可以達到抑制效果。

5. 利用抗病毒藥物

Ribaririn－對于ssRNA病菌有抑制作用，但是價(jià)格昂貴。

6. 營(yíng)養需求不同

因為不同的菌類(lèi)其營(yíng)養需求不同，因此可利用選擇性培養基可篩選或抑制一些微生物。

7. 利用水淹

利用水將植株清洗或是完全浸沒(méi)，以避免其上的接種源四處擴散。

8. 抽樣檢測

對于后代植株的抽樣檢測，可將污染嚴重的個(gè)體去除。以上這些方法可以綜合使用，以建立一個(gè)清潔的植株。

五、污染所造成的結果

1. 生產(chǎn)成本的提高。

2. 對植株造成傷害。

3. 增加接種源及污染的機率。

六、在組織培養過(guò)程各個(gè)階段所應注意事項

（1）目前組織培養之流程主要分兩種，如下圖所示：

在此兩種系統中，ModelⅠ和ModelⅡ之比較：

ModelⅠ：先做好一小批產(chǎn)品，再進(jìn)入量產(chǎn)，此每一單位為一瓶，且自為獨立環(huán)境，具區隔性，故有污染時(shí)所造成的傷害不大。

ModelⅡ：其為大容器系統，一旦有污染，則整批無(wú)法避免將會(huì )受到污染其培養基多為液體狀態(tài)。

（2） 各階段注意事項

stage0： 建立干凈的植株，以利下面階段的作業(yè)進(jìn)行。只要建立無(wú)菌的植株，則污染的來(lái)源便只是來(lái)自技術(shù)上的失誤。因此在此階段要將病株丟除，并且將其具較多污染源的植株去掉。一般會(huì )選擇較成熟的植株，因其病征易顯現找到植株后。分離其菌或病原菌，做系列稀釋以決定濃度。

stageⅠ：在stageⅠ的污染可蔓延培養基，故可利用“視覺(jué)”將之選出或丟棄，對于潛伏性或是表現微弱的菌種，需作特別的測試，在此階段，要對一般的微生物作測試及對已知的病原菌作測試，若兩種為負便可進(jìn)入stageⅡ。stageⅡ要把污染的植株去掉，知道病原菌并重復分生組織的培養。

stageⅡ：在此階段中，只有無(wú)菌的植株可繁殖。假設此植株為無(wú)菌，則污染源便來(lái)自操作室，故要先丟掉污染后，然后再取樣抽檢。

stageⅢ：如同stageⅡ。

stageⅣ：對后代植株需取樣檢查。

附：組織培養中污染及防止（上）-點(diǎn)擊查看

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