食品衛生微生物檢驗實(shí)驗室操作要求（上）

食品微生物實(shí)驗室工作人員，必須有嚴格的無(wú)菌觀(guān)念，許多試驗要求在無(wú)菌條件下進(jìn)行，主要原因：一是防止試驗操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個(gè)人污染。

 

 

    一、無(wú)菌操作要求

    1. 接種細菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。

    2. 進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專(zhuān)用的工作服、帽及拖鞋，應放在無(wú)菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線(xiàn)消毒后使用。

    3. 接種食品樣品時(shí)，應在進(jìn)無(wú)菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球將手擦干凈。

    4. 進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開(kāi)包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。

    5. 從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。

    6. 接種樣品、轉種細菌必須在酒精燈前操作，接種細菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開(kāi)試管塞都要通過(guò)火焰消毒。

    7. 接種環(huán)和針在接種細菌前應經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結核菌和烈性菌的接種環(huán)應在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。

    8. 吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應用相應的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。

 

    二、無(wú)菌間使用要求

    1. 無(wú)菌間通向外面的窗戶(hù)應為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開(kāi)，并設有與無(wú)菌間大小相應的緩沖間及推拉門(mén)，另設有0.5-0.7m2的小窗，以備進(jìn)入無(wú)菌間后傳遞物品。

    2. 無(wú)菌間內應保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實(shí)驗無(wú)關(guān)的物品。

    3. 無(wú)菌間使用前后應將門(mén)關(guān)緊，打開(kāi)紫外燈，如采用室內懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應注意不得直接在紫外線(xiàn)下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線(xiàn)穿透的影響。

    4. 處理和接種食品標本時(shí)，進(jìn)入無(wú)菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過(guò)小窗傳遞。

    5. 在無(wú)菌間內如需要安裝空調時(shí)，則應有過(guò)濾裝置

 

    三、消毒滅菌要求

    微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被污染和接種的培養物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。

 

   （一）干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法

    1．滅菌前準備

   （1）所有需要滅菌的物品首先應清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上面通氣孔打開(kāi)。

   （2）裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。

    2．裝放

   （1）干熱滅菌器：裝放物品不可過(guò)擠，且不能接觸箱的四壁。

   （2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過(guò)擠。

    3．設備檢查

   （1）檢查門(mén)的開(kāi)關(guān)是否靈活，橡皮圈有無(wú)損壞，是否平整。

   （2）檢查壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位，關(guān)好門(mén)和蓋，通蒸氣或加熱后，觀(guān)察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無(wú)堵塞。

   （3）對有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合于進(jìn)行滅菌處理的要求。

    4．滅菌處理

    (1) 干熱滅菌法：此法適應于在干熱情況下，不損壞、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品、較常用于玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等的滅菌。

      ① 器械器皿應清洗后再干烤，以防附著(zhù)在表面的污物炭化。

      ② 滅菌時(shí)安放物品不能過(guò)擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。

      ③ 菌時(shí)將箱門(mén)關(guān)緊，接上電源，先將排氣孔打開(kāi)約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調節指示燈，維持1.5 –2h。

      ④ 滅菌完畢后或溫度升溫過(guò)程中，須在60℃以下才能打開(kāi)箱門(mén)。

   (2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進(jìn)行：

     ① 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重復使用時(shí)應將水量補足，水變混濁需更換）.

     ② 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無(wú)軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用）。

     ③ 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開(kāi)頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰后排氣10-15min）。

     ④ 關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，并維持規定時(shí)間（按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定）。

     ⑤ 達到規定時(shí)間后，對需干燥的物品，立即打開(kāi)排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開(kāi)蓋取物，如為液體物品，不要打開(kāi)排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復至零，溫度降到60℃以下 再開(kāi)蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。

   (3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進(jìn)行：

    ① 關(guān)緊鍋門(mén)，打開(kāi)進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預熱，夾層內冷空氣經(jīng)阻氣器自動(dòng)排出。

    ② 夾層達到預定溫度后，打開(kāi)鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出。

    ③ 待鍋室達到規定的壓力與溫度時(shí)，調節進(jìn)氣閥，使保持恒定至

    ④ 自然或人工降溫至60℃再開(kāi)門(mén)取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。

    ⑤ 使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關(guān)緊門(mén)后，應根據物品類(lèi)別按動(dòng)相應開(kāi)關(guān)，以便按要求程序自動(dòng)進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)必須利用附設儀表記錄溫度與時(shí)間以備查，操作要求應嚴格按照廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

    5．滅菌溫度與時(shí)間(1) 干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時(shí)間

 

   （二）間歇滅菌方法

    1.滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。

    （1）將欲滅菌物品置于鍋內，蓋上頂蓋，打開(kāi)排水口，使器內余水排盡。

    （2）關(guān)閉排水口，打開(kāi)進(jìn)氣門(mén)，根據需要消毒10～20min。

    （3）滅菌完畢關(guān)閉進(jìn)氣門(mén)，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過(guò)夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。

    2．血清凝固器使用方法，培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時(shí)，因高熱會(huì )破壞其營(yíng)養成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的。

    (1) 在使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，需嚴格遵守無(wú)菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。

    (2)將培養基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過(guò)夜，再如此滅菌三次。

    3．煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15 min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min，加入0.02﹪甲醛, 80℃煮60 min均可達到滅菌目的, 但選用煮沸消毒的增消劑時(shí), 應注意對物品的腐蝕性.

    4．滅菌處理:滅菌后物品,按正常情況已屬無(wú)菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度污染。

    (1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無(wú)菌物品使用。

    (2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無(wú)菌物品使用。

    (3) 培養基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài),未達到者應廢棄。

    (4) 啟閉式容器,在取出時(shí)應將篩孔關(guān)閉。

    (5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到污染,不可作為無(wú)菌物品使用。

    (6) 取出的合格滅菌物品,應存放于貯藏室或防塵柜內,嚴禁與未滅菌物品混放。

    (7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限。