阪崎腸桿菌的生物學(xué)性狀與健康危害（上）

摘  要：阪崎腸桿菌是腸桿菌科的一種，1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結腸炎和茵血癥， 死亡率高達50％以上。目前， 微生物學(xué)家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來(lái)源，但許多病例報告表明嬰兒配方粉是目前發(fā)現的 主要感染渠道。 阪崎腸桿茵的生物學(xué)性狀及其對人群的健康危害受到人們的關(guān)注并被報告。 

關(guān)鍵詞： 腸桿菌， 阪崎；嬰兒食品； 食品微生物學(xué)；嬰兒，新生；腦膜炎；結腸炎

 

阪崎腸桿菌 (E．sakazakii)是人和動(dòng)物腸道內寄生的一種革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌，作為腸 桿菌科的一種，一直被稱(chēng)為黃色陰溝腸桿菌( Enterobacter  cloacae)，直到1980年才更名為 阪崎腸桿菌， ^［1］該菌是腸道正常菌叢中的一種，在一定條件下可引起人和動(dòng)物致病。1961年，Franklin等首次報道了2例由阪崎腸桿菌引起的腦膜炎病例。以后相繼在世界范圍內 (美 國、冰島、荷蘭等國家)報道了一系列新生兒阪崎腸桿菌感染事件。

阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結腸炎和菌血癥，并且可引起神經(jīng)系統后 遺癥和死亡，該菌感染引起的死亡率高達50％ 以上。  雖然現在還不能確定阪崎腸桿菌的 宿主和傳播模型，但在一些新生兒阪崎腸桿菌感染事件的調查中發(fā)現嬰兒配方粉是主要的感 染渠道。

 

1 生物學(xué)性狀

阪崎腸桿菌作為腸桿菌科腸桿菌屬的一種， 在1980年之前一直被稱(chēng)為黃色陰溝腸桿 菌。隨著(zhù)對該菌認識的加深，根據阪崎腸桿菌與陰溝腸桿菌DNA．DNA雜交、生化反應、 色素產(chǎn)生和抗生素敏感性的不同，研究人員對該菌的分類(lèi)提出了質(zhì)疑。1976年Steigerwah等發(fā)現腸桿菌屬菌株可分為與“黃色素存在或缺失”相關(guān)的兩種不同的DNA雜交群。1977年Brenner等發(fā)現可根據D一山梨醇產(chǎn)酸和延遲產(chǎn)生脫氧核糖核酸酶 (Deoxyribonuclease,D Nase ) 區分產(chǎn)色素和不產(chǎn)色素的菌株。^［3］1980年Farmer 等^［1］建議對產(chǎn)黃色素的陰溝腸桿菌重新分類(lèi)，在同一篇文獻中Farmer等指出通過(guò)DNA—DNA雜交他們發(fā)現阪崎腸桿菌之 間DNA一致性可達83％一89％， 而阪崎腸桿菌與陰溝腸桿菌的DNA共有序列只有31％ 一49％。

1．1  培養特征  

阪崎腸桿菌兼性厭氧， 營(yíng)養要求不高， 能在營(yíng)養瓊脂、血平板、麥康凱 ( Mac Conkey，MAC) 瓊脂、伊紅美藍 (eosin  methylene  blue，EMB) 瓊脂、脫氧膽酸瓊脂等多種培養基上生長(cháng)繁殖。

所有的阪崎腸桿菌都能在胰蛋白酶大豆瓊脂( trypticase  soy  agar，TSA) 上36℃快速生長(cháng)，24 h 后形成直徑2～3 mm的菌落；25 ℃生長(cháng)24 h 后形成直徑1 ～1．5mm的菌落， 48 h后形成直徑2～3mm的菌落。Farmer等發(fā)現阪崎腸桿菌在結晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(violet  red  bile  glucose  agar，VRBG) 平板上首次劃線(xiàn)分離時(shí)，生長(cháng)24 h后可生成2種或2種以上的菌落形態(tài)，一種干燥或粘液樣， 周邊呈放射狀，用接種環(huán)觸碰可發(fā)現菌落極富彈性； 另一種是典型的光滑型菌落，極易被接種環(huán)移動(dòng)。 目前， 尚不清楚這兩種不同的菌落是否存在毒力和其它表型上的差別。Farmer等發(fā)現在TSA平板上培養24 h 后， 所

有的阪崎腸桿菌都產(chǎn)生大量的沉淀物，像是包含團狀細胞和無(wú)定形組織 。  

 

1．2 生化反應

 Muytjens 等研究了阪崎腸桿菌和相關(guān)菌株的酶反應特點(diǎn)。在對229株 (其中129株是阪崎腸桿菌) 細菌的研究中發(fā)現阪崎腸桿菌和其它腸桿菌之間存在兩個(gè)主要的不同：阪崎腸桿菌a-葡萄糖苷酶活性均為陽(yáng)性，其它腸桿菌均為陰性(包括產(chǎn)氣腸桿菌(Enter obacter aerogenes )、 陰溝腸桿菌( Enterobacter  cloacae)、成團腸桿菌( Enterobacte agglomer ans))；所有試驗菌株中只有阪崎腸桿菌缺少磷酰胺酶。1985年Farmer 等又檢測了57株阪崎腸桿菌，其中53株a -葡萄糖苷酶活性為陽(yáng)性。由此認為，a-葡萄糖苷酶是用來(lái)快速區分阪崎腸桿菌和其它腸桿菌的可靠方法。1983年Aldova等^［6］評估了從捷克斯洛伐克分離的73株阪崎腸桿菌吐溫80脂酶的活性，結果顯示97．3％的菌株含有該酶。 1984年P(guān)ostupa和 Aldova ^［7］研究了從奶粉和嬰兒配方粉中分離到的6株阪崎腸桿菌，發(fā)現所有的菌株在25℃和3 7℃培養7d 后都產(chǎn)生吐溫80脂酶。大量的研究結果表明，阪崎腸桿菌的生化反應 與陰溝腸桿菌相似( 表 1 ) 。   ^［3］在鑒定阪崎腸桿菌時(shí)需注意，該菌總是氧化酶陰性、D一山梨醇陰性、產(chǎn)生吐溫80脂酶、細胞外DNAse陽(yáng)性并形成黃色菌落。

 

表 1   阪崎腸桿菌及相近腸道條件致病菌生化反應比較^［1］

注 ： ( 1 ) +： 9 0 ％ ～1 0 0 ％陽(yáng)性 ； (+) 7 5 ％ ～8 9 ％ 陽(yáng)性 ； v ： 2 5 ％ ～7 4 ％陽(yáng)

性 ； (一) ： 1 0 ％ ～2 4％陽(yáng)性 ； 一： 0 ％ ～9 ％陽(yáng)性 。

 

1．3抵抗力

Nazarowec-White等的早期研究認為嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌的污染與該菌的高度耐熱性有關(guān)。然而，Breeuwer等研究發(fā)現阪崎腸桿菌并非具有特殊的耐熱性，但能耐受一定程度的滲透壓和干燥。無(wú)論是Nazarowec．White等還是Breeu．wer等人的研究結果都證明，阪崎腸桿菌的耐熱性不足以使該菌經(jīng)標準的巴斯德消毒后幸存，產(chǎn)品的污染很可能發(fā)生在干燥和罐裝階段。與大腸埃希菌、沙門(mén)菌相比，阪崎腸桿菌對滲透壓和干燥具有更高的耐受力，這很可能與細胞內大量的海藻糖酶有關(guān)。

 

Edelson．Mammel和Buchanan研究了人工污染阪崎腸桿菌(根據生產(chǎn)商推薦的沖調方法， 配方粉稀釋液阪崎腸桿菌濃度約為106 CFU／m1 ) 的嬰兒配方粉長(cháng)期存放時(shí)細菌的生存態(tài)。在將近一 年半中配方粉室溫放置在一個(gè)密閉的帶蓋瓶子中，定期從中取樣做定量檢測，在 最初的5個(gè)月內，阪崎腸桿菌活菌數量下降了2．5 log CFU／ml (從6．0 log CFU／ml下降 到3．5 log CFU／m1)，每月約下降0．5 log CFu／m l。隨后的1年內阪崎腸桿菌活菌數量 又下降了0．5 log CFU／ml，終濃度約3．0 log CFU／ml。該結果證明阪崎腸桿菌能在嬰兒配方粉中長(cháng)期存活。^［2］ 

1．4 增殖能力

阪崎腸桿菌的傳代時(shí)間在6℃，21℃，37℃分別是13．7 h，1．7h，19～21mi n。對阪崎腸桿菌進(jìn)行危險性評估發(fā)現，與本底相比，25℃放置6 h該菌的相對危險性可增加30倍；25℃放置10 h 可增加30000倍。

因此，即使嬰兒配方粉中只有極微量的阪崎腸桿菌污染， 在配方粉食用前的沖調期和儲藏期該菌也可能會(huì )大量繁殖。2004年2月FAO／WHO在日內瓦召開(kāi)的嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌專(zhuān)家研討會(huì )上提出嬰兒配方粉中微量的阪崎腸桿菌(<3 CFU／100g ) 污染也能導致感 染的發(fā)生。 所以， 對奶粉和嬰兒配方粉的加工制作過(guò)程、家庭／醫院的滅菌過(guò)程以及嬰兒配方粉的儲存和食用等關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行嚴格管理，是減少該類(lèi)產(chǎn)品潛在危險性的重點(diǎn)。

 

1.5 毒力 

 國際上對阪崎腸桿菌的毒力因子和致病性知之甚少。Pagotto等^［10］在2003年首 次描述了某些阪崎腸桿菌可能產(chǎn)生一種毒力因子一類(lèi)腸毒素樣化合物。組織培養發(fā)現一些菌株可產(chǎn)生細胞毒效應。腹腔注射劑量達10⁸  CFU／只時(shí)，18株試驗株均可在3d內導致哺乳期小鼠死亡。經(jīng)口灌胃，只有2株能引起哺乳期小鼠致死性損傷。SK92 ( 腸毒素陽(yáng)性) 和 MNW6 (腸毒素陰性) 腹腔注射致死劑量最小而在最大口服劑量時(shí)仍不能引起小鼠的致死性 損傷。 由此看來(lái)， 阪崎腸桿菌之間的毒性存在明顯不同，而且，某些菌株可能是非致病性 的，這在某種程度上可能與細菌在胃的酸性環(huán)境中存活能力有關(guān)。