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    幽門(mén)螺桿菌感染的現行臨床診斷檢測技術(shù)(下)



    錄入時(shí)間:2010-10-25 8:49:40 來(lái)源:螺旋桿菌臨床研究進(jìn)展

    唾液幽門(mén)螺桿菌抗原檢測技術(shù)
      
    目前用唾液檢測口腔內幽門(mén)螺桿菌的抗原技術(shù),有唾液抗原ELISA檢測法(ELISA雙抗體夾心法),及我們Ameritek公司研發(fā)的唾液幽門(mén)螺桿菌抗原檢測技術(shù),此技術(shù)是我們研究團隊在過(guò)的10余年里研究和開(kāi)發(fā)的一種新的、快速的診斷檢測方法。這種方法在幽門(mén)螺桿菌侵入人體后,在病癥初期就可以把它檢測出來(lái)。此新的檢測技術(shù)的產(chǎn)品稱(chēng)"胃幽門(mén)螺桿菌唾液測試板(HPS),我們團隊已獲得技術(shù)專(zhuān)利,及中國和歐洲食品藥品監督管理局的注冊證書(shū)(12,13)。我們公司是一家專(zhuān)業(yè)從事體外診斷試劑產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)和銷(xiāo)售的高科技生物公司。我們有設備先進(jìn)、技術(shù)力量雄厚的螺旋桿菌實(shí)驗室,我們的實(shí)驗室是世界上少數能大規模培養幽門(mén)螺桿菌和收集其鞭毛的實(shí)驗室,能制備純化尿素酶(CagA)抗原和抗體,實(shí)驗室為我們提供了研發(fā)和生產(chǎn)幽門(mén)螺桿菌快速診斷試劑和殺滅幽門(mén)螺桿菌藥物的可能性。
    2.1 HPS
    檢測法的原理:HPS檢測法是采用純化尿素酶抗體,應用膠體金層析式雙抗體夾心法技術(shù)
    ,定性檢測唾液中幽門(mén)螺桿菌釋放的尿素酶抗原,從而診斷胃和口腔幽門(mén)螺桿菌感染,是一種靈敏度高、能夠特異性診斷人體幽門(mén)螺桿菌感染的快速試劑。
    2.2  HPS檢測法的使用方法:將體溫表式的測試卡長(cháng)端放在舌下吸取唾液,或將唾液吐在收集杯內作為測試標本。將標本滴在測試板收集口之后10分鐘左右,在觀(guān)察窗口出現一條紅線(xiàn)為陰性,出現二條紅線(xiàn)為陽(yáng)性。
     2.3  HPS
    檢測法與常用幽門(mén)螺桿菌檢測方法的比較:(1)Ameritek公司的HPS檢測法與胃粘膜組織切片W-S銀染鏡檢比較,39例有上消化道癥狀的初診成年患者,內鏡檢查前接受HPS檢測,內鏡下胃幽門(mén)竇部粘膜活檢組織W-S銀染直接觀(guān)測幽門(mén)螺桿菌。39例中HPS陽(yáng)性29(74.4%),切片染色鏡檢陽(yáng)性25(64.1%),在切片染色鏡檢陽(yáng)性25例中HPS陽(yáng)性21(84%)。(2)Ameritek公司的HPS檢測法與C14尿素呼氣試驗比較,169例消化科門(mén)診初診成年病人,接受HPS檢測后即進(jìn)行C14尿素呼氣試驗。169例中HPS陽(yáng)性124(73.4%), C14尿素呼氣試驗陽(yáng)性73(43.2%),C14尿素呼氣試驗陽(yáng)性73例中HPS陽(yáng)性71(97.3%)。(3)Ameritek公司的HPS檢測法與血清抗體測定比較,44例有上消化道癥狀的成年患者,接受HPS檢測后采血測定血清中Hp-IgG、IgM抗體。44例中HPS陽(yáng)性35(79.5%),血清總抗體陽(yáng)性39(88.6%),在總抗體陽(yáng)性39例中35HPS陽(yáng)性(89.7%)。三組有上消化道癥狀的成年患者,HPS陽(yáng)性率分別為74.4%、73.4%、79.5%;切片染色鏡檢、尿素呼氣試驗、血清總抗體陽(yáng)性率分別為64.1%、43.2%、88.6%;切片染色鏡檢、尿素呼氣試驗、血清總抗體陽(yáng)性者,HPS陽(yáng)性率分別為84%、97.3%、89.7%。以上結果顯示:采用HPS檢測法,口腔幽門(mén)螺桿菌檢出率高于胃內幽門(mén)螺桿菌檢出率,胃內幽門(mén)螺桿菌檢測陽(yáng)性者,口腔幽門(mén)螺桿菌檢出率尤高。

    2.4  胃與口腔幽門(mén)螺桿菌感染的相關(guān)性  自從1989Krajden等首次成功地從胃炎病人牙菌斑中分離培養出幽門(mén)螺桿菌以來(lái),關(guān)于口腔作為胃外幽門(mén)螺桿菌另一聚居地的假設倍受人們關(guān)注。近年來(lái),國內外學(xué)者有關(guān)胃幽門(mén)螺桿菌感染與口腔幽門(mén)螺桿菌感染相關(guān)性的研究報道頗多,主要集中在口腔是幽門(mén)螺桿菌常棲居區域之一,還是含有幽門(mén)螺桿菌胃液返流口腔所致尚存在爭議。常用于檢測幽門(mén)螺桿菌的"金標準",如牙菌斑或唾液細菌培養和口腔粘膜括片染色鏡檢,尚難以在口腔中作出與胃內相同且穩定的結果?谇恢芯旱膹碗s性可能是影響從口腔中分離出幽門(mén)螺桿菌的重要因素,另一個(gè)影響結果的因素是幽門(mén)螺桿菌在口腔中分布不均勻。陳發(fā)明等(14)發(fā)現齲病部位牙菌斑幽門(mén)螺桿菌陽(yáng)性率明顯高于非齲病部位的牙菌斑。盡管幽門(mén)螺桿菌是否在口腔中定棲尚未有結論,但胃和口腔幽門(mén)螺桿菌感染的相關(guān)性已得到多數學(xué)者認同。Wang(15)PCR法檢測31例胃病患者的胃粘膜組織與其唾液中4種不同幽門(mén)螺桿菌基因型,CagA、VacAm1、VacAm2以及VacAS1,結果顯示,95%的胃粘膜與其相應唾液至少一種幽門(mén)螺桿菌基因型相同,80% 2種基因型一致,59% 3種基因型一致,27% 4種基因型均一致。彭惠等(16)SSCP-PCR法檢測到胃粘膜和唾液中幽門(mén)螺桿菌的兩種VacA基因型的一致性為98%。提示口腔和胃內幽門(mén)螺桿菌具有同源性。李明等(17)采用光鏡下涂片或切片染色和快速尿素酶試驗聯(lián)合檢測的方法,對口腔和胃內幽門(mén)螺桿菌同步檢測結果顯示,口腔中幽門(mén)螺桿菌檢出率為90.56%(326/360),胃內幽門(mén)螺桿菌檢出率為70%(252/360%)(P<0.005)。顯示口腔與胃內幽門(mén)螺桿菌同步檢測結果,口腔中幽門(mén)螺桿菌檢出率明顯高于胃內檢出率,提示口腔中幽門(mén)螺桿菌可能是胃內幽門(mén)螺桿菌的重要來(lái)源。Miyabayashi(18)研究47例幽門(mén)螺桿菌陽(yáng)性胃病患者,根除治療后用巢式PCR檢測唾液中HpDNA,結果發(fā)現,唾液中幽門(mén)螺桿菌陽(yáng)性患者其根治率(12/23,52.1%)明顯低于唾液幽門(mén)螺桿菌陰性患者(22/24,91.6%)(P<0.05)。隨訪(fǎng)2,唾液中幽門(mén)螺桿菌陽(yáng)性組胃病緩解率為69.5%,陰性組為95.8%(P<0.05)。侯海玲等(19)觀(guān)察58例胃粘膜尿素酶試驗陽(yáng)性患者,其中W-S銀染陽(yáng)性56(96.5%),細菌培養陽(yáng)性49(84.5%)。此58例胃幽門(mén)螺桿菌感染者,口腔牙菌斑或漱口液尿素酶試驗至少一項陽(yáng)性25(43.1%)。58例經(jīng)根除治療后4周接受胃幽門(mén)螺桿菌檢測,胃和口腔幽門(mén)螺桿菌均陽(yáng)性的25例中,9例胃中再次檢出幽門(mén)螺桿菌,其根除率64%(16/25),低于口腔幽門(mén)螺桿菌陰性者的根除率72.7%(24/33(P<0.05)。1年后口腔幽門(mén)螺桿菌陽(yáng)性者的胃根除率下降為36%(9/25),顯著(zhù)低于口腔陰性者的63.6%(21/33)(P<0.05)?谇粌扔拈T(mén)螺桿菌的存在,可影響根除治療的療效,并且可能是胃病復發(fā)的一個(gè)重要因素。

    2.5  HPS檢測法的臨床應用及評價(jià):作者曾在浙江大學(xué)醫學(xué)院附屬笫一醫院等多個(gè)單位做了臨床實(shí)驗,結果如下:(1)126例有上消化道癥狀的初診患者,進(jìn)行HPS檢測后,同步接受內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗、切片W-S銀染鏡檢或14C尿素呼氣試驗,HPS陽(yáng)性率為73.02%(92/126),尿素酶試驗、銀染鏡檢和呼氣試驗總陽(yáng)性率為53.17%(67/126),67例尿素酶試驗、銀染鏡檢或呼氣試驗陽(yáng)性患者HPS陽(yáng)性率為70.15%(47/67)。(2)129例內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗和/或切片W-S銀染鏡檢證實(shí)胃幽門(mén)螺桿菌感染的患者,接受PPI三聯(lián)7天療法,療程結束后至少4周進(jìn)行C13C14尿素呼氣試驗,同步作HPS檢測,HPS陽(yáng)性率為75.97%(98/129),呼氣試驗總陽(yáng)性率為34.11%(44/129),44例呼氣試驗陽(yáng)性患者HPS陽(yáng)性率為88.64%(39/44)。(3)33例無(wú)上消化道癥狀的志愿者,檢測HPS后同步接受C14尿素呼氣試驗,HPS陽(yáng)性率為81.82%(27/33),呼氣試驗陽(yáng)性率為21.21%(7/33),7例呼氣試驗陽(yáng)性者HPS陽(yáng)性率為100%(7/7)。(4)35例有消化不良癥狀的患兒,進(jìn)行HPS檢測后同步接受C13呼氣試驗27,HPS陽(yáng)性率為88.57%(31/35),呼氣試驗陽(yáng)性率為25.93%(7/27),7例呼氣試驗陽(yáng)性者HPS陽(yáng)性率為100%(7/7)。(5)150HPS陽(yáng)性的志愿者,隨機分成兩組,治療組105,接受我們Ameritek公司研發(fā)試生產(chǎn)的多聚賴(lài)氨酸復合體配制的漱口液和口腔噴霧劑治療2個(gè)月;對照組45,未給于任何治療。治療組于治療結束后2周進(jìn)行HPS復查,對照組同時(shí)接受檢測,治療組HPS陰轉率為81.91%(86/105),對照組無(wú)1例轉陰。

    結果顯示:(1) 4HPS檢測陽(yáng)性率為73.02%~88.57%,與多數報道相似(17,20),支持唾液中存在高幽門(mén)螺桿菌檢出率現象。(2) 4組中經(jīng)內鏡下胃粘膜快速尿素酶試驗、切片W-S銀染鏡檢、C13C14尿素呼氣試驗陽(yáng)性,證實(shí)有胃幽門(mén)螺桿菌感染患者,同步HPS檢測陽(yáng)性率為70.15%~100%。(3) 胃幽門(mén)螺桿菌感染合并口腔幽門(mén)螺桿菌感染患者,可影響PPI三聯(lián)7天療法的療效,且對口腔幽門(mén)螺桿菌感染的治療幾乎無(wú)效。(4) 多聚賴(lài)氨酸復合體配制的漱口液和口腔噴霧劑,對口腔幽門(mén)螺桿菌感染有明顯療效,HPS檢測陰轉率為81.91%,對照組無(wú)1例轉陰。

        目前,雖然對口腔是幽門(mén)螺桿菌定植地之一,還是胃液返流造成口腔中出現幽門(mén)螺桿菌的問(wèn)題,至今尚存在爭論,但是口腔內存在幽門(mén)螺桿菌已是不爭的事實(shí)。多數學(xué)者認為幽門(mén)螺桿菌僅寄居于人類(lèi),人與人之間的傳播是唯一的傳播途徑,-口、胃-口傳播是主要的傳播方式,-口傳播可能是幽門(mén)螺桿菌隨脫落的胃上皮通過(guò)胃、食道返流入口腔,同時(shí)口腔中的幽門(mén)螺桿菌也可隨吞咽入胃?谇徽衬づc胃粘膜同屬消化系統,均來(lái)自外胚層,其結構、功能、生理、病理有許多相似之處,唾液腺特異性血凝素的存在,是幽門(mén)螺桿菌在口腔中寄生的原因。幽門(mén)螺桿菌利用其代謝產(chǎn)生的尿素酶分解尿素形成"氨云",造成有利于幽門(mén)螺桿菌生存和繁殖的特殊生態(tài)學(xué)龕(21)。作者認為,口腔幽門(mén)螺桿菌感染,不但與牙周病、齲病、口腔復發(fā)性潰瘍、口腔扁平苔癬、口臭等口腔疾病有關(guān),口腔很有可能確為幽門(mén)螺桿菌的胃外定植地,是胃幽門(mén)螺桿菌的重要儲存庫,可源源不斷的將幽門(mén)螺門(mén)桿菌伴隨唾液和食物吞咽到胃內,引起胃幽門(mén)螺桿菌病的發(fā)生和復發(fā)。

    2.6 HPS檢測法的適應證: HPS檢測法采用的標本是唾液,適用于所有人群。體溫表式測試卡,將卡放置舌下吸取唾液即可進(jìn)行檢測;測試板只需收集唾液,可由醫務(wù)人員進(jìn)行檢測;嬰幼兒及不能主動(dòng)配合者,如能用塑料吸管吸取到唾液也可進(jìn)行測試。HPS檢測法、ELISA檢測法都是從唾液中檢測幽門(mén)螺桿菌抗原,ELISA檢測法需在有一定設備的實(shí)檢室進(jìn)行。HPS檢測法主要用于檢查口腔幽門(mén)螺桿菌感染和胃幽門(mén)螺桿菌感染,可作為口腔疾病的一種常規檢查,也可作為消化科胃病和消化不良病因的篩選,亦可用于口腔和胃、特別是口腔幽門(mén)螺桿菌感染治療后的療效判定。

    現在我把目前存在的主要檢測方法歸納為三大類(lèi)別,并作一具體比較, 見(jiàn)表5-1

    5-1: 胃幽門(mén)螺旋桿菌臨床主要檢驗方法對比表

     

    胃鏡法

    C14同位素呼氣法(22)

    HPS 唾液法(23,24,25,26)

    原理

    檢出病理灶及進(jìn)行標本生化或化學(xué)法測出螺旋桿菌

    間接檢出螺旋桿菌抗原

    間接檢出螺旋桿菌抗原

    檢驗標本

    病理切片

    呼出氣體

    唾液

    精確度

    病理切片精確度高,化學(xué)反應法精確度低,小病灶容易漏檢

    精確度高(判斷患者是否有胃幽門(mén)螺旋菌感染)

    精確度高, 同時(shí)判斷患者口腔和胃幽門(mén)螺旋菌感染

    特異性

    , 對診斷毒性螺旋桿菌具有盲區

    檢驗所需時(shí)間

    數小時(shí),病理報告數天

    自服用同位素到呼出氣體需1小時(shí)

    5-10分鐘

    檢驗方法繁復

    繁復

    繁復

    簡(jiǎn)單

    基礎設備費用

    昂貴

    昂貴

    不需要

    試劑費用

    中等

    昂貴

    檢驗風(fēng)險

    中等

    不安全

    安全

    病人接受程度

    有害怕心理

    病人害怕同位素

    容易接受

    對環(huán)境影響

    無(wú)

    有嚴重的環(huán)境污染,同位素在人體內半衰期為7320年,全衰期為6萬(wàn)年。

    無(wú)

    適宜人群

    不適宜孕婦兒童

    不適宜孕婦、哺乳婦婦女和兒童

    適用所有年齡段人群

    檢驗方法專(zhuān)利情況

    專(zhuān)利已過(guò)期

    美國專(zhuān)利

    美國,中國專(zhuān)利

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