細菌檢驗工作的基本技術(shù)——基本染色法（下）

三、鞭毛染色

    用于觀(guān)察菌體上有無(wú)鞭毛、鞭毛在菌體上的位置以及鞭毛的數量。在細菌鑒定中，特別是非發(fā)酵菌的鑒定中很重要。

    鞭毛染色可以直接從平板上挑選菌落，或從斜面上刮菌苔涂片即可，但必須注意動(dòng)作盡量輕，以免鞭毛從菌體上脫落。菌落應是

 生長(cháng)在營(yíng)養較好的瓊脂平板(如血平板、營(yíng)養瓊脂)上的過(guò)夜培養物。不可采用有抑制劑的選擇性培養基，如中國藍、麥康凱、SS瓊脂等。觀(guān)察鞭毛時(shí)，應耐心尋找整個(gè)涂片上的菌細胞，因為并不是涂片上每個(gè)細菌細胞上的鞭毛特性及數量都一樣，應以鞭毛數量最多的菌細胞為準。

鞭毛染色(改良Ryu法)

試劑

A液：    5％石炭酸            10ml

            鞣酸                     2g

            飽和硫酸鋁鉀液    10ml

B液：  結晶紫酒精飽和液

    應用液：A液10份，B液1份，混合，室溫存放。

染色方法

   1．玻片的處理：要求用新的載玻片。用前須在95％酒精中浸泡24小時(shí)以上。用時(shí)從酒精中取出，以干凈紗布擦干后使用。

   2．在玻片上滴蒸餾水兩滴。一張玻片上可同時(shí)制2個(gè)涂片。

   3．用接種環(huán)挑取血平板上菌落少許，將細菌點(diǎn)在玻片上的蒸餾水滴的頂部。一般只需點(diǎn)一下，僅允許極少量細菌進(jìn)入水滴，不可攪動(dòng)，以免鞭毛脫落。

    4．玻片置室溫自然干燥。

    5．滴加染液于玻片上，染色。

    6．約10～15min后，用蒸餾水緩慢沖去染液。沖洗時(shí)應避免使染液表面的金屬光澤液膜滯留在玻片上，影響鏡檢。

    7．玻片自然干燥后，鏡檢時(shí)應從涂片的邊緣開(kāi)始，逐漸移向中心。尋找細菌較少的視野，鞭毛容易觀(guān)察。細菌密集的地方，鞭毛被菌體擋住，不易觀(guān)察。

 

 

 

    四、異染顆粒染色

    用于白喉棒狀桿菌染色，異染顆�？擅黠@地被顯示出來(lái)。

標本直接涂片或細菌涂片均可用改良阿伯特(Albert)法染色來(lái)觀(guān)察異染顆粒。

試  劑

甲液：                甲苯胺藍        0.15g

                         孔雀綠           0.2g

                         冰醋酸           1ml

                         95％乙醇        2ml

                         蒸餾水        100ml

將各染料先溶于乙醇，然后加入水與冰醋酸的混合液中，充分混勻。靜置24h后過(guò)濾備用。

乙液：                碘               2g

                         碘化鉀        3g

                         蒸餾水        300ml

先將碘化鉀加少許蒸餾水(約2m1)，充分振搖，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸餾水至300ml。

    染色方法

    1. 涂片經(jīng)火焰固定，加甲液，染3～ 5 min。水洗。

    2．滴加乙液，染l min。水洗。

3．干后鏡檢，菌體呈綠色，異染顆粒呈藍黑色。

 

五、墨汁莢膜染色

用于觀(guān)察菌體有無(wú)莢膜結構，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。

傳統的方法是用印度墨汁，但目前國內無(wú)售。常規工作可以用墨汁或墨水代替，但應注意顆粒不能太粗，否則影響觀(guān)察結果。有人用5％黑色素(nigrosin)水溶液做染料，效果較好。

試  劑

印度墨汁或5％黑色素水溶液。

染色方法