3．3％鹽酸酒精；
染色的第一步是制作涂片。菌液涂片時(shí)，用接種環(huán)沾取菌液點(diǎn)在載玻片上，標本可直接在玻片上涂布。菌落涂片時(shí)，先取生理鹽水 1滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì )改變菌細胞原有的排列形式，或造成細菌鞭毛脫落，影響結果的準確性。制備的涂片應自然干燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜過(guò)高，以玻片背面接觸手背不燙為準，否則可能使細胞形態(tài)改變。將固定后的涂片進(jìn)行染色。
一、革蘭染色
本染色是最基本的染色法，可用于標本涂片或菌落涂片。染色結果將細菌分為革蘭陽(yáng)性(紫色)和革蘭陰性(紅色)兩類(lèi)。
試劑
1. 結晶紫溶液
A液： 結晶紫 2g
95％乙醇 20ml
B液： 草酸銨 0.8g
蒸餾水 80ml
需在用前24h將A液、B液混合，過(guò)濾后裝入試劑瓶?jì)葌溆谩?
2．碘液
碘 1g
碘化鉀 2g
蒸餾水 300ml
碘與碘化鉀混合并研磨，加入幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續加入少量蒸餾水至完全溶解。最后補足水量。
也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再加入碘片，待完全溶解后，加水至300ml。
3．脫色液：95％乙醇。
4．復染液
A. 貯存液： 沙黃 2.5g
95％乙醇 100ml
B. 應用液： A液 10ml
蒸餾水 90ml
染色方法：
1．涂片經(jīng)火焰固定，加結晶紫液染1 min，清水沖去染液。
2．加碘液染l min，水洗。
3．加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約10～30s，至無(wú)紫色脫落為止，水洗。
4．加復染液，染30s，水洗。
5．干后鏡檢。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰標本時(shí)，可以適當增加標本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時(shí)，須掌握復染色時(shí)間。如果背景過(guò)深，影響鏡檢。
奴卡菌及放線(xiàn)菌可呈弱抗酸性，取培養菌落涂片染色時(shí)，呈現兩種現象，視野中有些菌細胞陽(yáng)性，另外一些則陰性；有時(shí)同一個(gè)菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀(guān)察時(shí)應予注意。
抗酸染色有兩種常用方法：① 堿性復紅法又稱(chēng)萋納(Ziehl—Neelsen)法。 ② 熒光染料金胺O法(也稱(chēng)金胺O-羅丹明B法)。
(一) 堿性復紅染色法
試 劑
1．萋納石炭酸復紅溶液
堿性復紅乙醇飽和溶液 10ml
5％石炭酸溶液 90ml
2．脫色劑 *
濃鹽酸 3ml
95％乙醇 97ml
3．復染液(呂弗勒美藍液)
美藍乙醇飽和溶液 30ml
10％氫氧化鉀 0.1ml
蒸餾水 100ml
染色方法
1．涂片經(jīng)火焰固定，加石炭酸復紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現，切不可沸騰。染5 min(若染色奴卡菌需要加長(cháng)時(shí)間)，水洗。
2．加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無(wú)紅色脫落為止，水洗。
3．加復染液，染0.5～l min，
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