含酚紅培養基該如何滅菌

一、酚紅基本性質(zhì)

  酚紅（Phenol red）是一種三苯甲烷型有機化合物，化學(xué)式為C₁₉H₁₄O₅S，分子量354.38，常溫下為深紅色結晶粉末。

1、溶解性

  可溶于乙醇、氫氧化鈉及碳酸鈉溶液，微溶于水，不溶于三氯甲烷和乙醚。

2、酸堿指示特性

  作為酸堿指示劑，其變色范圍為pH 6.4-8.2。

二、酚紅主要應用領(lǐng)域

1、微生物培養與檢測

  在培養基中作為pH指示劑，用于監測微生物代謝活動(dòng)。例如尿素分解菌產(chǎn)氨導致環(huán)境堿化時(shí)，酚紅會(huì )從黃色漸變?yōu)榧t色或橙色。

2、細胞培養

  指示培養基pH狀態(tài)：中性呈紅色，酸性變黃（可能存在細菌污染），堿性呈紫色（需調整CO2濃度）。

三、培養基常用滅菌方法

  常用的滅菌方法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、過(guò)濾除菌法、化學(xué)滅菌法和輻射滅菌法。其中過(guò)濾除菌法通過(guò)0.22 μm濾膜截留微生物，操作具有操作快速、不破壞熱敏物質(zhì)、保持液體熱敏成分活性的優(yōu)點(diǎn)，常用于抗生素溶液、液體培養基及血清等熱敏液體的滅菌。輻射滅菌利用紫外線(xiàn)和γ射線(xiàn)破壞微生物核酸結構，可大規模連續操作且無(wú)需加熱，滅菌效果徹底多用于食品和工業(yè)領(lǐng)域。

四、含酚紅產(chǎn)品滅菌方法

  含酚紅培養基的滅菌方法需根據其成分特性（如熱敏性物質(zhì)的存在）選擇合適的方式，選擇高壓蒸汽滅菌、過(guò)濾滅菌或輻照滅菌。滅菌后需結合酚紅顏色變化及培養基透明度、pH值等指標綜合驗證滅菌效果。

五、試驗方法

  配制酚紅母液，分別溶解于500 mL DPBS溶液中，配制酚紅溶液，使其終濃度為10 mg/L，15 mg/L，20 mg/L，25 mg/L，2k Gy輻照滅菌（模擬培養基滅菌過(guò)程），觀(guān)察酚紅溶液狀態(tài)，結果如圖1。

圖1 酚紅溶液輻照滅菌結果

  圖中溶液從左到右分別為①輻照后25 mg/L酚紅溶液、②輻照后20 mg/L酚紅溶液、③輻照后15 mg/L酚紅溶液、④輻照后DPBS溶液對照、⑤未輻照10 mg/L酚紅溶液

六、試驗結果

  由圖中④可發(fā)現，輻照不會(huì )影響DPBS溶液的狀態(tài)，溶液仍呈無(wú)色、澄清透明。由圖中①、②、③與⑤對比可發(fā)現，輻照會(huì )使酚紅溶液出現變色，未輻照的酚紅溶液呈深紅色，溶液澄清透明；輻照過(guò)后的酚紅溶液變?yōu)樽睾稚�，溶液澄清透明。由圖中①、②、③對比可知，酚紅溶液的變色程度與酚紅添加量呈正相關(guān)，呈現由深到淺的棕褐色。

  根據試驗結果可知，在輻照過(guò)后，不同濃度的酚紅溶液均出現了變色，查閱資料得知，酚紅在輻照過(guò)后變色主要有以下幾個(gè)原因：

1、直接破壞：高能射線(xiàn)破壞化學(xué)鍵

  （1）靶向苯環(huán)結構，輻射的高能量可直接打斷苯環(huán)的共軛雙鍵，破壞其電子離域系統，導致顯色能力喪失。

  （2）脫磺酸化反應，磺酸基團可能被輻射破壞，生成硫酸鹽碎片降低分子穩定性。

2、間接破壞：自由基氧化

  （1）自由基生成，輻射作用于水分子時(shí)，產(chǎn)生羥基自由基、超氧自由基等活性氧成分。

  （2）自由基攻擊酚紅分子中的醌式雙鍵和苯環(huán)，引發(fā)氧化反應，導致結構降解；降解產(chǎn)物可能為無(wú)色或黃色化合物。

七、總結

  輻照會(huì )引起酚紅溶液變色，進(jìn)而影響其作為酸堿指示劑的功能，同時(shí)輻照還會(huì )產(chǎn)生鄰苯醌等物質(zhì)，可能對細菌和細胞培養產(chǎn)生不利影響。因此含酚紅的液體培養基在滅菌時(shí)可選擇添加對應的保護劑；或選擇其他滅菌方式，如過(guò)濾除菌，避免酚紅分子結構遭到破壞。

八、產(chǎn)品展示

  我司生產(chǎn)的含酚紅產(chǎn)品如下：

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