李斯特氏菌的協(xié)同溶血試驗

一、試驗簡(jiǎn)介

  李斯特氏菌協(xié)同溶血試驗（CAMP試驗）是一種用于檢測李斯特氏菌（特別是單增李斯特氏菌，Listeria monocytogenes）與其他細菌（如金黃色葡萄球菌或馬紅球菌）之間協(xié)同溶血作用的試驗方法。該試驗是鑒定李斯特氏菌的重要方法之一，尤其在區分致病性李斯特氏菌和非致病性菌株時(shí)非常重要。

二、試驗原理

  CAMP試驗基于細菌溶血素之間的協(xié)同作用。單增李斯特氏菌能夠產(chǎn)生一種稱(chēng)為李斯特菌溶血素O（LLO，Listeriolysin O）的毒素，這種毒素可以溶解紅細胞。在CAMP試驗中，單增李斯特氏菌與金黃色葡萄球菌（菌株ATCC 25923）共同培養時(shí)，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的β-溶血素會(huì )增強單增李斯特氏菌的溶血作用，從而在兩種細菌的交界處形成明顯的箭頭狀溶血區。馬紅球菌產(chǎn)生的膽固醇氧化酶也可以增強某些細菌溶血素的作用。

三、試驗方法

  1. 培養基制備：使用含5%-7%羊血或馬血的血瓊脂平板（HB8519-1 7%羊血瓊脂基礎+1001339-1 脫纖維羊血/HBPM6235 血平皿平板）。

  2. 劃線(xiàn)接種：在羊血瓊脂平板上平行劃線(xiàn)接種金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）和馬紅球菌，挑取純培養的單個(gè)可疑菌落垂直劃線(xiàn)接種于平行線(xiàn)之間，垂直線(xiàn)兩端不要觸及平行線(xiàn)，距離1mm~2mm，同時(shí)接種單增李斯特氏菌、英諾克李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌，于36℃±1℃培養24h~48h。

  3. 觀(guān)察兩種細菌交界處的溶血現象。若結果不明顯，可置4℃冰箱24h~48h后再觀(guān)察。

四、結果判斷

  1. 單增李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌處出現約2mm的β-溶血增強區域，5%~8%的單增李斯特氏菌在馬紅球菌一端也有溶血增強現象；

  2. 斯氏李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌處出現微弱的溶血增強區域；

  3. 伊氏李斯特氏菌在靠近馬紅球菌處出現約5mm~10mm的“箭頭狀”β-溶血增強區域；

  4. 英諾克李斯特氏菌不產(chǎn)生溶血現象。

  接種菌株，放置于36℃±1℃需氧培養24h~48h，試驗結果如圖1所示。

圖1 協(xié)同溶血試驗結果

備注：?jiǎn)蚊�A：待測菌落；英李：英諾克李斯特氏菌ATCC 33090；單李：?jiǎn)卧隼钏固厥暇鶤TCC 19114；斯李：斯氏李斯特氏菌ATCC 35967；伊李：伊氏李斯特氏菌ATCC 19119；馬紅球：馬紅球菌CICC 22955；金葡：金黃色葡萄球菌ATCC 25923

五、注意事項

  1. 使用新鮮的血瓊脂培養基以確保紅細胞活性。

  2. 兩種細菌的劃線(xiàn)距離應適中（1mm-2mm），過(guò)近或過(guò)遠可能影響結果。

  3. 建議同時(shí)接種已知協(xié)同溶血陽(yáng)性和陰性李斯特氏菌作為對照。

  4. 協(xié)同菌株的選擇：金黃色葡萄球菌必須使用菌株ATCC 25923，若使用其他金黃色葡萄球菌菌株，可能會(huì )影響單增李斯特氏菌協(xié)同溶血現象的觀(guān)察，結果如圖2所示。具體原因可參考往期原創(chuàng )文章：《細菌溶血試驗原理及現象》。

圖2 協(xié)同溶血試驗結果

備注：?jiǎn)蚊�B：待測菌落；英李：英諾克李斯特氏菌ATCC 33090；單李：?jiǎn)卧隼钏固厥暇鶤TCC 19114；斯李：斯氏李斯特氏菌ATCC 35967；伊李：伊氏李斯特氏菌ATCC 19119；馬紅球：馬紅球菌CICC 22955；金葡：金黃色葡萄球菌ATCC 6538

注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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