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一些細菌在生長(cháng)過(guò)程中，可以產(chǎn)生溶血素，使紅細胞破裂溶解，在血平板上生長(cháng)時(shí)，菌落周?chē)捎^(guān)察到透明或半透明的溶血環(huán)，許多細菌的致病性都與溶血特性相關(guān)。由于不同細菌產(chǎn)生的溶血素不同，溶血能力也不相同，在血平板上的溶血現象也不相同，因此，溶血試驗常用來(lái)進(jìn)行細菌的鑒定。
（1）α溶血、β溶血和γ溶血
α溶血又稱(chēng)草綠色溶血，在菌落周?chē)捎^(guān)察到1~2mm的草綠色半透明溶血環(huán)，為高鐵血紅蛋白所致，α溶血環(huán)中的紅細胞未完全溶解，是一種不完全溶血現象，常見(jiàn)的產(chǎn)生α溶血的菌株為肺炎鏈球菌、甲型溶血性鏈球菌。
圖1 肺炎鏈球菌在血平板上的α溶血現象
β溶血又稱(chēng)為完全溶血，在菌落周?chē)捎^(guān)察到2～4mm界限分明、完全透明的溶血環(huán)。β溶血環(huán)中的紅細胞完全溶解，是細菌產(chǎn)生的溶血素使紅細胞完全溶解所致，許多致病性強的菌株都可形成β溶血，如乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌等。γ溶血即不溶血，菌落周?chē)鸁o(wú)溶血現象。
注：制作溶血試驗用的血平板，特別是金黃色葡萄球菌的溶血試驗，通常選用脫纖維綿羊血。這是因為綿羊紅細胞的細胞膜中的神經(jīng)鞘磷脂含量較高，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的β溶血素作用于神經(jīng)鞘磷脂裂解紅細胞，試驗中更易觀(guān)察到溶血現象。
圖2 金黃色葡萄球菌的β溶血和糞腸球菌的γ溶血
注：部分金黃色葡萄球菌不表現β溶血
圖3 蠟樣芽胞桿菌的β溶血
注：部分蠟樣芽胞桿菌表現為α溶血
圖4 產(chǎn)氣莢膜梭菌的β溶血
注：產(chǎn)氣莢膜梭菌有兩種溶血素，能產(chǎn)生雙溶血環(huán)，在β溶血環(huán)外圍可隱約看到寬度約為3-5mm的不透明微弱溶血環(huán)
（2）李斯特氏菌溶血試驗
圖5 李斯特氏菌溶血試驗
單增李斯特氏菌的溶血現象較弱，直接采用劃線(xiàn)接種方法時(shí)在血平板上較難觀(guān)察到溶血現象，因此在《GB4789.30-2016單核細胞增生李斯特氏菌檢驗》標準中，采用穿刺接種法可以更好的觀(guān)察到李斯特氏菌的溶血現象，單增李斯特氏菌、斯氏李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌可觀(guān)察到明顯的β溶血環(huán)，英諾克李斯特氏菌無(wú)溶血。
（3）協(xié)同溶血試驗（CAMP）
一些細菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的β-溶血素溶解紅細胞的活性，因此在兩菌的交界處溶血力增加，出現箭頭狀或半月?tīng)钔该魅苎獏^域。該試驗常用于B群鏈球菌的鑒定，也用于單增李斯特氏菌的鑒定。
試驗方法：挑取金黃色葡萄球菌ATCC25923在血平板上劃平行直線(xiàn)，再挑取待測菌株垂直劃線(xiàn)，距離金黃色葡萄球菌接種線(xiàn)約1mm但不要接觸，置于36℃培養24-48h。
注：為何使用金黃色葡萄球菌ATCC25923做協(xié)同溶血試驗，而不是任意一株金黃色葡萄球菌都能做？
金黃色葡萄球菌發(fā)生溶血主要靠四種溶血素：α、β、γ和δ。其中α、γ和δ溶血素又稱(chēng)為“打孔毒素”，在細胞膜上形成孔道，小分子和離子可以自由進(jìn)出細胞，導致細胞代謝發(fā)生紊亂，最終發(fā)生裂解。而β溶血素的溶血機理不同，是通過(guò)水解細胞膜的鞘磷脂裂解細胞。多數金黃色葡萄球菌都有兩種以上的溶血素基因高效表達，在血平板上可觀(guān)察到完全透明的β溶血環(huán)，少數金黃色葡萄球菌只有β溶血素基因高效表達或無(wú)溶血素基因表達，在血平板上微弱溶血或不溶血。
金黃色葡萄球菌ATCC25923是一株表型不完全溶血的菌株，該菌主要產(chǎn)生β溶血素，在血平板上溶血現象非常微弱。B群鏈球菌可以產(chǎn)生一種CAMP蛋白（非酶蛋白），可以與β溶血素協(xié)同作用快速裂解紅細胞，產(chǎn)生溶血現象。因此，在靠近金黃色葡萄球菌ATCC25923的B群鏈球菌周?chē)梢杂^(guān)察到明顯的溶血增強現象。而其他金黃色葡萄球菌若不產(chǎn)生β溶血素或本身產(chǎn)生多種溶血素形成了完全透明的β溶血，則無(wú)法發(fā)生協(xié)同溶血或無(wú)法觀(guān)察到協(xié)同溶血現象。
圖6 無(wú)乳鏈球菌（B群鏈球菌）協(xié)同溶血試驗
圖7 李斯特氏菌協(xié)同溶血試驗
（4）神奈川現象
該試驗是副溶血性弧菌特有的溶血現象，副溶血性弧菌在普通血平板上不溶血或只呈現α溶血，但在含高鹽（7%）的人O型血或兔血以及D-甘露醇做為碳源的我妻氏瓊脂平板上可產(chǎn)生β溶血。副溶血性弧菌致病性越強，溶血現象越明顯。
圖8 神奈川試驗現象（左為副溶血性弧菌，右為溶藻弧菌）
（5）培養基的選擇及制備注意事項
在《GB4789.10-2016金黃色葡萄球菌檢驗》標準中，使用的是豆粉瓊脂加5%-10%的脫纖維羊血或兔血；在《GB4789.11-2014β型溶血性鏈球菌檢驗》標準中，使用的是哥倫比亞血瓊脂基礎加5%脫纖維綿羊血；在《GB4789.14-2014蠟樣芽胞桿菌檢驗》標準中，使用的是胰酪胨大豆羊血瓊脂；在《GB4789.30-2016單增李斯特氏菌檢驗》標準中，使用的是5%-8%的羊血瓊脂。其他文獻或標準中也有使用TSA或BHI補加5%-10%脫纖維羊血做成的血瓊脂。以上培養基做出來(lái)的效果基本一致，本質(zhì)上都是觀(guān)察溶血效果，選擇哪種培養基并不影響結果觀(guān)察（注：神奈川試驗使用的是單獨的我妻氏培養基加入兔紅細胞制成的平板，該培養基不能用于其他溶血試驗觀(guān)察）。
注意事項：
1.血液要選用新鮮的無(wú)菌脫纖維血，制備如血液出現變色則不能使用。
2.配制培養基時(shí)，應預先將血液溫育到40-50℃左右，待培養基冷卻至50℃左右時(shí)加入血液，輕輕搖勻。若血液與培養基溫差過(guò)大，制成的平板易出現凝塊。若搖晃幅度過(guò)大，易產(chǎn)生大量氣泡，制成的平板不平整。
3.血液對溫度比較敏感，加入血液時(shí)培養基溫度不能過(guò)高，加入血液混勻后應立即倒平板，不能長(cháng)時(shí)間保溫，否則會(huì )導致制成的平板顏色偏深。
4.制成的平板不宜過(guò)厚，15mL-20mL為宜，平板過(guò)厚不利于觀(guān)察溶血環(huán)。
5.制成的平板應在2-8℃左右低溫冷藏，不宜儲存過(guò)久，若儲存過(guò)程發(fā)現平板變黑或變透明，則不能使用。
相關(guān)產(chǎn)品：
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
