培養基煮沸滅菌的操作要領(lǐng)

一、問(wèn)題

  有客戶(hù)反饋，購買(mǎi)某需煮沸滅菌的培養基，往粉末中加開(kāi)水，煮沸不超過(guò)1分鐘，經(jīng)常出現污染。還有客戶(hù)反饋，不知道怎么樣算是煮沸。

  本文就煮沸滅菌培養基的制備方法和操作要領(lǐng)再做系統試驗展示，以方便廣大試驗操作人員能熟練掌握這一方法。

二、試驗方案

  1、有關(guān)培養基怎樣完全溶解的試驗

  取兩種常見(jiàn)的培養基，VRBA和XLD，用同樣的煮沸方法，分別煮至不同的溫度和次數，對倒成的平板進(jìn)行強度測試，從側面反應培養基煮沸溶解的效果。

  2、有關(guān)培養基能否滅菌徹底的試驗

  取三種培養基，VRBA、XLD和TSA，前兩種為常見(jiàn)的煮沸滅菌培養基，TSA為常規需要高壓滅菌的培養基。用同樣的煮沸方法，分別煮沸不同的次數，將倒成的平板進(jìn)行空培養，觀(guān)察菌落生長(cháng)情況，以直觀(guān)把握培養基是否滅菌徹底。

三、試驗操作與結果

  1、強度試驗

 （1）稱(chēng)取一定量的VRBA干粉，按比例加入純化水（涼水），充分攪拌，無(wú)成團現象后，進(jìn)行加熱。分別加熱至60℃、70℃、80℃、90℃、100℃煮沸1次、100℃煮沸2次、100℃煮沸3次，傾倒平板，測定其強度。結果如下（表1、圖1），低于100℃的情況下，倒出的平板強度較低，甚至不能完全凝固，不能滿(mǎn)足要求。煮至100℃，平板強度明顯增大，且隨著(zhù)煮沸次數的增多，平板強度值也會(huì )增高。至少煮沸3次，平板強度趨于穩定。

表1 VRBA培養基煮至不同溫度制成的平板的強度

圖1  VRBA培養基煮至不同溫度制成的平板的強度

 （2）分別按照比例配制200mL、500mL、1000mL的VRBA培養基和XLD培養基，每個(gè)容量級分別加熱煮沸1-5次，傾倒成平板后測其強度，結果如下（表2、圖2），煮沸3次，強度明顯增高，且煮沸次數越多，平板強度越高。煮沸至三次，平板強度趨于穩定。不同配制量的培養基，如200mL、500mL和1000mL，煮沸相同的次數，平板強度無(wú)明顯差異，所以，不管配制量多少，只要培養基煮沸次數夠多，即培養基充分煮透，即可滿(mǎn)足要求。從強度來(lái)看，至少應煮沸3次。

表2 不同量的培養基煮沸不同次數制成的平板強度

圖2-1 不同量的VRBA培養基煮沸不同次數制成的平板強度

圖2-2 不同量的XLD培養基煮沸不同次數制成的平板強度

圖2 不同量的培養基煮沸不同次數制成的平板強度

  2、滅菌試驗

  三種培養基，不同用量分別煮沸不同的次數制成的平板，空培養后的菌落生長(cháng)情況如下（圖3），VRBA和XLD煮沸1-5次，平板上均無(wú)菌落生長(cháng)，常規需要高壓滅菌的TSA培養基煮沸1-5次，平板上均有菌落生長(cháng)。因此，一般的培養基不能用煮沸的方法進(jìn)行滅菌，但VRBA、XLD之類(lèi)的選擇性培養基，采用煮沸滅菌的方法完全可行，可有效殺滅細菌。從滅菌徹底性來(lái)說(shuō)，只要煮沸1次即可滿(mǎn)足要求。為確保萬(wàn)無(wú)一失，建議盡量多煮沸幾次。

圖3-1 VRBA培養基平板培養結果

圖3-2 XLD培養基平板培養結果

圖3-3 TSA培養基平板培養結果

圖3 三種培養基平板空培養的結果

四、結論和煮沸狀態(tài)展示

  從上面的試驗可以看出，為了保證煮沸滅菌的完全溶解性和徹底滅菌性，至少應該煮沸3次。

  不同煮沸次數時(shí)，培養基的狀態(tài)如圖4，三種培養基均表現為：煮沸1次，泡沫多而密集；煮沸3次泡沫減少，仍布滿(mǎn)整個(gè)液面；煮沸5次，泡沫更少，中心能看到液體。所以，為減少泡沫的產(chǎn)生，應該盡量多煮幾次，至少煮沸3次。

  綜合以上各方面考慮，實(shí)際操作中通常煮4-6次。

  實(shí)際工作中，每次煮沸的培養基的量可能會(huì )有很大差異，煮沸的指標是以煮沸次數來(lái)定的，不是以煮沸時(shí)間來(lái)判斷的，只要次數足夠，一定能煮出合格好用的培養基。

  有關(guān)煮沸操作的其它細節，請參考“干粉培養基煮沸滅菌的操作方法及注意事項”，相關(guān)視頻可參考“培養基的加熱滅菌操作”。

圖4 培養基煮沸不同次數后呈現的狀態(tài)

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