干粉培養基煮沸滅菌的操作方法及注意事項

一、滅菌方法簡(jiǎn)介

  培養基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理，將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過(guò)濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。其中，濕熱滅菌法又包括四種方式：煮沸法、流動(dòng)蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來(lái)說(shuō)，使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。

  但是對于有些培養基來(lái)說(shuō)，高壓條件會(huì )損壞培養基中的某些成分，不利于培養基的使用，所以只能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進(jìn)行討論。

二、煮沸滅菌的常見(jiàn)表述

  有關(guān)煮沸滅菌的描述，通常有如下幾種方式：

  a、稱(chēng)取本品41.5g，加熱溶解于1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過(guò)2分鐘。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過(guò)3小時(shí)。（參考VRBA培養基：點(diǎn)擊查看）

  b、稱(chēng)取本品50.3g，加入1000ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，冷至45-50℃，搖勻，傾入無(wú)菌平皿備用。無(wú)需高壓滅菌。（參考BS培養基：點(diǎn)擊查看）

  c、稱(chēng)取本品89g，煮沸溶解于1000ml蒸餾水中，冷至45-50℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，備用。注：無(wú)需高壓滅菌。（參考TCBS培養基：點(diǎn)擊查看）

  d、稱(chēng)取本品57g，加熱攪拌溶解于1000ml蒸餾水中，不要過(guò)分加熱，冷至50-55℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿,部分開(kāi)蓋干燥2h，然后蓋上，備用。無(wú)需高壓滅菌。在 24小時(shí)內使用。（參考XLD培養基：點(diǎn)擊查看）

  這些方法描述中，都特別強調“無(wú)需高壓滅菌”、“不要過(guò)分加熱”、“煮沸充分溶解”，那么究竟該怎樣操作，才能達到既滅菌完全又盡量降低對培養基的破壞呢？

三、煮沸滅菌的實(shí)際操作

  1、關(guān)于煮沸方式，有人提出可以隔水煮沸，但經(jīng)過(guò)反復試驗，發(fā)現這種煮沸方式存在兩大弊端：①溫度不夠，達不到滅菌效果；②經(jīng)隔水煮沸的含瓊脂培養基，在水浴的過(guò)程中易出現分層現象。

  2、為了對培養基進(jìn)行有效煮沸滅菌，根據我們實(shí)踐摸索，建議如下操作：

  ①準備好電磁爐和搪瓷缸（不要用鐵質(zhì)容器）；

  ②將培養基按比例加水，稱(chēng)量至搪瓷缸中，用玻璃棒不斷攪拌，直至完全溶解、無(wú)明顯團狀物或顆粒；

  ③將搪瓷缸置于電磁爐上，大火燒開(kāi)，期間持續攪拌，避免糊底；當液面完全沸騰后，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開(kāi)，算是一次煮沸操作；液面回落后，立即放回電磁爐，重復上面的步驟；總共煮沸3次即可。

  ④將煮好的培養基冷卻至需要的溫度，進(jìn)行傾注平皿等操作。

四、注意事項

  1、補水

  加熱煮沸的過(guò)程，培養基中的部分水分會(huì )蒸發(fā)掉，造成水分偏少，影響培養基的質(zhì)量（如平板強度等），導致菌落形態(tài)等結果的偏差，因此為了盡量減少誤差，需要在煮沸之前，向搪瓷缸中補加適量培養基配制用水，經(jīng)驗估計，通常每煮一缸培養基需補加15-20ml水，實(shí)際操作中，需根據各實(shí)驗室的具體情況（容器大小及裝量）進(jìn)行摸索。

  2、溶解

  所有的培養基，在煮之前必須攪拌至完全溶解，不允許將尚有成團培養基的狀態(tài)下，直接進(jìn)行加熱煮沸，那樣很容易出現滅菌不徹底的現象，尤其是有些含瓊脂的培養基，甚至會(huì )有部分瓊脂不能徹底溶解，導致倒出的平皿上有明顯的麩皮狀瓊脂小顆粒，或者有些含有染料的培養基也可能出現染料顆粒，都會(huì )影響培養基的使用（所述各種情況見(jiàn)下圖）。

  正確操作：

  錯誤操作：

  平板上出現未完全融化的瓊脂顆粒：

  3、攪拌

  煮沸全程必須持續不斷攪拌，以免糊底。

  4、防燙

  液面沸騰后，要及時(shí)將搪瓷缸從電磁爐上取下，以免液體沸出，造成培養基沾染或燙傷操作人員。

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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