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一、雙歧桿菌屬情況簡(jiǎn)要介紹：
雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）是一種革蘭氏陽(yáng)性、不運動(dòng)、細胞呈桿狀、一端有時(shí)呈分叉狀、嚴格厭氧的細菌屬，廣泛存在于人和動(dòng)物的消化道、陰道和口腔等生境中。雙歧桿菌屬的細菌是人和動(dòng)物腸道菌群的重要組成成員之一。
在1899年，法國巴斯德研究所的兒科醫生Henry Tissier從母乳喂養的健康嬰兒的糞便中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽(yáng)性桿菌，命名為Bacillus bifidus。隨后，Tissier發(fā)現這種分叉狀的桿菌能治療腸道感染方面的疾病。在Tissier發(fā)現雙歧桿菌以后，人們發(fā)現了更多的雙歧桿菌屬的成員，人們對雙歧桿菌的生理功能進(jìn)行了深入的發(fā)掘與研究，經(jīng)過(guò)一個(gè)世紀的發(fā)展，特別是近年腸道微生物組學(xué)研究的發(fā)展，人們越來(lái)越認識到雙歧桿菌的重要性。雙歧桿菌在醫藥、食品等方面也得到了廣泛的應用。
二、產(chǎn)品用途及檢驗原理：
該培養基用于食品中雙歧桿菌的分離培養或計數。
添加劑：每瓶需配套添加8盒HB0384-6a莫匹羅星鋰鹽和2盒HB0384-11a半胱氨酸鹽酸鹽溶液使用。
蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉在培養基中作為基礎營(yíng)養物質(zhì)提供細菌生長(cháng)所需的氮源、碳源和其他的生長(cháng)因子；葡萄糖為可發(fā)酵糖類(lèi)；磷酸氫二鉀為pH緩沖劑；檸檬酸三銨、醋酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳和吐溫80為培養各種乳酸菌提供生長(cháng)因子，其成分還能抑制某些雜菌并中和細胞毒性物質(zhì)，為乳酸菌提供一個(gè)良好的生長(cháng)環(huán)境；莫匹羅星鋰鹽抑制除雙歧桿菌外的其他乳酸菌的生長(cháng)；半胱氨酸鹽酸鹽具有降低氧化還原電位的作用，防止過(guò)氧化物的積累對某些菌產(chǎn)生毒性，有利于厭氧菌的生長(cháng)；瓊脂為培養基的凝固劑。
三、培養基配方（g/L）：
|
蛋白胨 |
10.0 |
|
牛肉浸粉 |
10.0 |
|
酵母浸粉 |
5.0 |
|
葡萄糖 |
20.0 |
|
K2HPO4·7H2O |
2.0 |
|
檸檬酸三銨 |
2.0 |
|
醋酸鈉·3H2O |
5.0 |
|
MgSO4·7H2O |
0.1 |
|
MnSO4·4H2O |
0.05 |
|
瓊脂 |
15.0 |
|
吐溫80 |
1.0 |
|
pH值6.2±0.2（25℃） |
|
四、試驗方法：
1. 稱(chēng)取本品66.2g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝，121℃高壓滅菌15-20分鐘，冷至48℃左右，每200mL培養基中加入過(guò)濾除菌的莫匹羅星鋰鹽10mg和半胱氨酸鹽酸鹽0.1g，混勻。
2. 目標菌：10倍梯度稀釋法制備質(zhì)控菌株菌懸液，吸取適宜梯度的菌懸液傾注接種于待測培養基和參比培養基；
非目標菌：用1µL接種環(huán)取選擇性測試工作菌懸液1環(huán)，在待測培養基表面劃六條平行直線(xiàn)。
3. 放置于恒溫培養箱36℃±1℃厭氧培養48h±2h，觀(guān)察試驗結果。
五、試驗結果判斷：
接種以下質(zhì)控菌株，放置36℃±1℃厭氧培養48h±2h，試驗結果如圖1所示。
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
接種量 （CFU） |
參比或計 數培養基 |
方法 |
生長(cháng)情況 |
其他特征 |
|
嬰兒雙歧桿菌 |
CICC 6069 |
20-200 |
MRS |
定量 |
PR≥0.7 |
圓形凸起，邊緣整齊，無(wú)色不透明 |
|
德氏保加利亞亞種 |
CICC 6032 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
|
嗜熱鏈球菌 |
CICC 6038 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
|
嗜酸乳桿菌 |
CICC 6005 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤1 |
抑制 |
質(zhì)控目標菌（嬰兒雙歧桿菌）在MRS上的計數結果：
質(zhì)控菌在改良MRS上的生長(cháng)情況：
圖1 莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良MRS瓊脂培養基微生物質(zhì)控結果
六、注意事項
1. 非目標菌檢驗時(shí)，用接種環(huán)而不用接種針，接種環(huán)應完全浸入培養基中。取一滿(mǎn)環(huán)接種物，將接種環(huán)接觸容器邊緣3次可去除多余的液體。劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)與瓊脂平面的角度應為20°~30°。接種環(huán)壓在瓊脂表面的壓力和劃線(xiàn)速度前后一致，整個(gè)劃線(xiàn)應快速連續，移取液體培養物時(shí)應將接種環(huán)伸入培養液下部分以防止環(huán)上產(chǎn)生氣泡或泡沫。
2. 嬰兒雙歧桿菌為厭氧菌，氧氣對其有毒害作用，應在厭氧操作箱中操作，若是在正常環(huán)境中操作，從厭氧菌暴露在空氣中開(kāi)始到放入厭氧環(huán)境中培養結束，整個(gè)過(guò)程應盡可能快速操作，一般不超過(guò)15分鐘，暴露時(shí)間越長(cháng)，厭氧菌越容易死亡。
厭氧菌培養相關(guān)信息可參考原創(chuàng )文章：專(zhuān)性厭氧菌的培養方法及注意事項-點(diǎn)擊查看。
相關(guān)產(chǎn)品：
莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良MRS瓊脂培養基（GB4789.35-2023）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
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