李氏菌增菌肉湯（LB1,LB2）基礎原理及使用方法

一、用途：

  添加萘啶酮酸，吖啶黃素即為L(cháng)B1，LB2，用于李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013，GB 4789.30-2016)。

二、實(shí)驗原理：

  胰胨、多價(jià)胨和酵母膏提供氮源、維生素和生長(cháng)因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩沖劑；七葉苷為可發(fā)酵的糖類(lèi)；萘啶酮酸和吖啶黃為選擇性抑菌劑，抑制非李斯特氏菌的生長(cháng)。

三、培養基配方（g/L）：

此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養成分以獲得最佳的結果

四、試驗方法：

  1、稱(chēng)取本品49.4g， 加熱攪拌溶解于 1000ml蒸餾水中，分裝， 121℃高壓滅菌15分鐘，備用。

    LB1液：每225ml培養基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黃素（3.0mg/支）；

    LB2液：每200ml培養基中加入1支萘啶酮酸（4.0mg/支）和1支吖啶黃素（5.0mg/支）。

  2、制備質(zhì)控菌液。

  3、混合菌的接種

  在裝有待測培養基的試管中接種10-100CFU的目標菌，并接種1000-5000CFU的非目標菌，接種總量1ml，同時(shí)接種兩個(gè)平行管，混勻。同時(shí)分別將目標菌菌懸液（與試管接種同一稀釋度）和非目標菌菌懸液（比試管接種小10-100倍稀釋度）1ml傾注平板，接種兩個(gè)平板，作接種量計數用，30±1℃培養18-24小時(shí)。

  4、非目標菌接種

  在裝有待測培養基的試管中接種1000-5000CFU的非目標菌，接種量1ml，同時(shí)接種兩個(gè)平行管，混勻，30±1℃培養18-24小時(shí)。

  5、培養液的接種

  5.1混合菌培養液的接種

  用10μL接種環(huán)取1環(huán)經(jīng)培養后的混合菌培養液，換線(xiàn)接種到PALCAM上，每管接種一個(gè)平板，36±1℃培養24-48小時(shí)。

  5.2非目標菌培養液的接種

  吸取10μL經(jīng)培養后的非目標菌培養液，均勻涂布接種到TSA上，每管接種一個(gè)平板。也可使用傾注法進(jìn)行接種，36±1℃培養18-24小時(shí)。

  6、記錄實(shí)驗結果

  目標菌在選擇性平板上的菌落應>10CFU，則表示待測液提培養基的生長(cháng)率良好；非目標菌在非選擇性平板上的菌落<100CFU，則表示待測液體培養基的選擇性為良好。

五、結果觀(guān)察與解釋：

  接種以下質(zhì)控菌株，在30±1℃培養18-24小時(shí)：

圖1-2 李氏菌增菌肉湯（LB2）微生物質(zhì)控結果

備注：a：?jiǎn)卧隼钏固厥暇�，b：大腸埃希氏菌，c：糞腸球菌，d：空白對照

六、注意事項：

  本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。

相關(guān)產(chǎn)品：

李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情

相關(guān)標準：

GB 4789.30-2016 單核細胞增生李斯特氏菌檢驗 點(diǎn)擊下載

GB 4789.28-2013 培養基和試劑的質(zhì)量要求 點(diǎn)擊下載

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