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一、簡(jiǎn)介：
在進(jìn)行微生物試驗時(shí)，菌種的挑選特別重要。除了要選對菌種外，還要注意對菌體生長(cháng)狀態(tài)的把握。
通常來(lái)說(shuō)很多標準中都對試驗用菌有要求，有的會(huì )明確要求用培養多長(cháng)時(shí)間的菌進(jìn)行后續試驗，食品檢驗標準中經(jīng)�？梢钥吹竭@類(lèi)描述，如“挑取單個(gè)典型黑色菌落接種到FTG培養基，36℃±1℃培養18h～24h，用于后續的確證試驗�！薄叭∩L(cháng)旺盛的FTG培養液1 mL接種于含鐵牛乳培養基……”（參考GB4789.13 食品微生物學(xué)檢驗 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗），而有些標準則不厭其煩地強調“新鮮培養物”，如《中國藥典》中，在培養基靈敏度檢查部分，就再三強調這一點(diǎn)，“菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至胰酪大豆胨液體培養基中或胰酪大豆胨瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，30°C～35°C培養18h～24h；接種白色念珠菌的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培養基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養基上”（參考《中國藥典》 2020版 第157頁(yè)）……
二、試驗說(shuō)明
標準中之所以這么要求，是希望能用最優(yōu)狀態(tài)的菌種，做出最明顯的效果，保證試驗結果的可靠性。本文以平板上不同區域菌體的形態(tài)差別對此問(wèn)題進(jìn)行說(shuō)明：分別將大腸埃希氏菌（典型的革蘭氏陰性菌）和金黃色葡萄球菌（典型的革蘭氏陽(yáng)性菌），在TSA平板上三區劃線(xiàn)、培養，然后將每種菌分別從同一平板上的三個(gè)區域挑菌、涂片、鏡檢，觀(guān)察它們的菌體形態(tài)，為了方便觀(guān)察，涂片后先用結晶紫進(jìn)行染色，再進(jìn)行鏡檢觀(guān)察。結果如下（圖1、圖3）：
圖1 大腸埃希氏菌在平板上三區劃線(xiàn)培養后的菌落及菌體狀態(tài)
大腸埃希氏菌(Escherichia coli，E.coli)，革蘭氏陰性短桿菌，大小0.5微米~0.5×3微米。從鏡檢結果不難發(fā)現，同一平板上不同區域長(cháng)出的菌體，形態(tài)差別非常明顯：一區的菌體為短桿狀甚至點(diǎn)狀，有些菌體已經(jīng)明顯衰亡；二區桿狀形態(tài)的菌體明顯增多，且比一區的桿狀菌體較長(cháng)、較粗；三區菌體全部為較長(cháng)的桿狀且非常粗壯，與對數生長(cháng)期菌體在掃描電鏡下的狀態(tài)基本一致（如圖2）。
圖2 掃描電鏡下對數生長(cháng)期的大腸埃希氏菌形態(tài)
金黃色葡萄球菌，作為一種典型的革蘭氏陽(yáng)性菌，三個(gè)區域內菌體差異雖然沒(méi)有那么顯著(zhù)，但也呈現出同樣的規律（如圖3）。
圖3 金黃色葡萄球菌在平板上三區劃線(xiàn)培養后的菌落及菌體狀態(tài)
三、討論：
同一平板的不同區域的同一種菌呈現不同的形態(tài)，可以直觀(guān)解釋為一區菌體密度太大，二區次之，三區菌體密度較小所致。其根本原因在于，同等面積的區域上菌體密度過(guò)大，會(huì )造成菌體間營(yíng)養競爭，有些菌體因為營(yíng)養不良生長(cháng)較差或長(cháng)不出來(lái)，同時(shí)區域內的優(yōu)勢菌株還可能產(chǎn)生一些細胞毒素等，遏制其它菌體的生長(cháng)。而三區內的菌營(yíng)養比較充足，生長(cháng)幾乎不受影響，所以菌體狀態(tài)最好。
我們做實(shí)驗時(shí)，通常都會(huì )要求用生長(cháng)狀態(tài)最好的菌，有時(shí)候用新鮮菌體能做出很明顯的陽(yáng)性結果，但如果菌體不新鮮，就會(huì )形成假陰性結果（參考氧化酶試驗的操作方法及注意要點(diǎn)）。
綜上所述，在微生物試驗過(guò)程中，無(wú)論制作菌液還是進(jìn)行菌株鑒定等，一定要注意菌體的新鮮度和菌體的健壯程度，盡量選用新鮮健壯的菌體進(jìn)行試驗。如果是在平板上挑菌，我們通常挑取三區生長(cháng)的單菌落進(jìn)行后續試驗。
相關(guān)標準：
GB 4789.13-2012 產(chǎn)氣莢膜梭菌檢驗 點(diǎn)擊下載
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
