影響培養基pH的因素

  在市場(chǎng)上購買(mǎi)的商品化脫水培養基，大多數廠(chǎng)家已經(jīng)調整了pH到正確范圍內，只需加水溶解后滅菌即可使用，有些培養基因成分原因或受其他因素的影響，導致滅菌后的pH不在范圍內，需要進(jìn)行調整。

培養基pH的規定：

  培養基滅菌前后通常會(huì )有變化，大多數培養基以滅菌后的pH為準，《GB4789.28 培養基和試劑的質(zhì)量要求》中規定，“除特殊說(shuō)明外，培養基滅菌后冷卻至25℃時(shí)，pH應在標準pH±0.2范圍內。一般使用濃度約為40g/L（約1mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L）的鹽酸溶液調整培養基的pH。如需滅菌后進(jìn)行調整，則使用滅菌或除菌的溶液�！�

影響培養基pH的因素：

  1.滅菌溫度和時(shí)間

  市場(chǎng)上售賣(mài)的高壓蒸汽滅菌鍋性能存在差異，滅菌鍋整個(gè)滅菌過(guò)程的持續時(shí)間會(huì )導致培養基pH的變化不同。特別是對于一些含糖量較高又不含緩沖體系的培養基（如沙氏葡萄糖瓊脂、硫乙醇酸鹽流體培養基、MRS培養基等）影響更大，一些小型的滅菌鍋滅菌較快，培養基中的成分變化較小，滅菌后的培養基pH相對比較穩定，而一些大型滅菌鍋或滅菌柜則不相同，整個(gè)滅菌過(guò)程持續時(shí)間比較長(cháng)，而且受裝載量、內部物品分布等因素影響，滅菌后的培養基通常pH會(huì )偏低（主要是因為培養基中的糖類(lèi)成分在高溫下會(huì )出現焦化現象，溫度越高，高溫持續時(shí)間越久，焦化現象越明顯，直觀(guān)上表現為培養基的pH下降和顏色加深）。因此，在使用大型滅菌鍋制備大量培養基時(shí)，應預先進(jìn)行滅菌工藝驗證，若滅菌后的pH不正確，可在滅菌前進(jìn)行調整。

  2.培養基的保溫時(shí)間

  一些瓊脂培養，滅菌后可能不會(huì )立即使用，許多人會(huì )選擇放50℃左右水浴保溫，也有些人會(huì )選擇直接燜在滅菌鍋里保溫。水浴保溫相對影響較小，而滅菌鍋的溫度相對較高，保溫過(guò)程易造成培養基內的糖類(lèi)焦化，導致培養基pH下降。因此，滅完菌的培養基應及時(shí)從滅菌鍋取出，在50℃左右保溫一般不超過(guò)4h，可繼續使用。

  3.培養基的反復溶化

  已凝固的培養基，再次融化時(shí)需要加熱處理，相當于增加了培養基的受熱時(shí)間，復溶次數越多，培養基pH變化越大，同時(shí)也會(huì )導致瓊脂的凝膠強度下降。因此，已凝固的培養基通常只允許復溶一次使用。

  4.培養基的溶解過(guò)程

  大多數廠(chǎng)家的培養基標簽上都寫(xiě)著(zhù)滅菌前需進(jìn)行加熱溶解，加熱后再進(jìn)行滅菌的培養基溶解比較均勻，而且有利于滅菌過(guò)程中的熱穿透，若滅菌前未進(jìn)行加熱滅菌，易導致培養基pH變化不穩，特別是含瓊脂的培養基，滅菌前不加熱易導致培養基分布不均勻，滅菌不徹底。含碳酸鹽的培養基，滅菌前不加熱易導致滅菌后的培養基pH偏低。

  5.水質(zhì)問(wèn)題

  若配制培養基使用的水質(zhì)不佳，偏酸或偏堿，或含有一些離子，都有可能會(huì )導致培養基的pH出現偏差。

  6.添加成分的影響

  有些培養基在滅菌后需添加一些營(yíng)養成分增強營(yíng)養或增加選擇性，一些添加劑會(huì )對培養基的pH造成較大影響，如L-半胱氨酸鹽酸鹽酸性較強，加入培養基后會(huì )導致pH下降，因此應預先對培養基的pH進(jìn)行調整，確保加入特定成分后的培養基pH依然在合格范圍內。

  7.測量溫度

  在標準中規定測定培養基的pH應以25℃為準，大多數沒(méi)有緩沖體系的營(yíng)養類(lèi)培養基pH隨著(zhù)溫度降低而升高，測量溫度不對時(shí)會(huì )導測量的pH出現偏差，有些pH計雖然有溫度補償功能，但是這個(gè)模式并不能完全適用于培養基的測定，因此必須要在25℃時(shí)測定培養基的pH。

  8.pH計的準確度

  受緩沖液的配制、校準過(guò)程等各種因素影響，pH計的準確度也會(huì )存在誤差，這種誤差是不可避免的，大多數pH計的廠(chǎng)家認為誤差范圍應控制在±0.05以?xún)取?/span>

培養基pH的調整：

  通�？墒褂�1mol/L的鹽酸和氫氧化鈉進(jìn)行調整，也可使用碳酸鈉、酒石酸或蘋(píng)果酸等弱堿弱酸進(jìn)行調整，有些特殊的培養基，如培養軍團菌用的BCYE、GVPC培養基，因鈉離子對軍團菌生長(cháng)不利，需要用氫氧化鉀進(jìn)行調整pH。

相關(guān)標準：

GB 4789.28-2013 培養基和試劑的質(zhì)量要求 點(diǎn)擊下載

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