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一、克羅諾桿菌屬情況簡(jiǎn)要介紹
克羅諾桿菌屬（Cronobacter）屬于腸桿菌科，革蘭氏陰性桿狀菌，（0.6～1.0）μm×（1.2～3.0）μm。不形成芽孢，無(wú)莢膜，形成周生鞭毛。需氧或兼性厭氧，最適溫度為30℃～37℃。37℃培養18h～24h菌落圓形、微凸、光滑濕潤、黃色、邊緣整齊，直徑為2mm～3mm。
克羅諾桿菌屬廣泛分布于自然界中，在食品、飲料、加工原料、生產(chǎn)環(huán)境等都能分離到該菌�？肆_諾桿菌屬與散發(fā)的或小規模暴發(fā)的敗血癥、腦膜炎、大腦炎、壞死性小腸結腸炎相關(guān)。大多數感染被發(fā)現于低體重新生兒（如低于2kg）或者早產(chǎn)兒（即妊娠少于37周）。報道死亡率高達50%，但近年來(lái)已經(jīng)降低到20%�？肆_諾桿菌的傳染源目前還不清楚。但在生產(chǎn)奶粉和其他食品的工廠(chǎng)或家庭中被頻繁地檢測到。商業(yè)生產(chǎn)的未消毒嬰兒配方奶粉常被作為該菌暴發(fā)時(shí)的感染源。雖然嬰兒配方奶粉以外的傳染源尚未被發(fā)現，但是在環(huán)境中的傳染源可能還是存在的。
二、參考標準
《GB 4789.40-2016 食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗》點(diǎn)擊下載
三、檢驗方法以及結果分析
第一法克羅諾桿菌屬定性檢驗
3.1檢驗程序
克羅諾桿菌屬檢驗程序見(jiàn)圖1。
圖1 克羅諾桿菌屬檢驗程序
3.2操作步驟
3.2.1 前增菌和增菌
取檢樣100g（mL）置滅菌錐形瓶中，加入900mL已預熱至44℃的緩沖蛋白胨水，用手緩緩地搖動(dòng)至充分溶解，36℃±1℃培養18h±2h。移取1mL轉種于10mL mLST-Vm（改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯-萬(wàn)古霉素）肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
質(zhì)控菌株接種到mLST-Vm肉湯中，培養結果如下圖所示：
圖2 不同細菌在mLST-Vm肉湯上的生長(cháng)情況
3.2.2 分離
輕輕混勻mLST-Vm肉湯培養物，各取增菌培養物1環(huán)，分別劃線(xiàn)接種于兩個(gè)阪崎腸桿菌顯色培養基平板，顯色培養基須符合GB4789.28的要求，36℃±1℃培養24 h±2 h，或按培養基要求條件培養。
阪崎腸桿菌劃線(xiàn)接種到海博阪崎腸桿菌顯色培養基平板，培養結果如下圖所示：
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阪崎腸桿菌ATCC 29544 阪崎腸桿菌CICC 10318 |
圖3 阪崎腸桿菌在阪崎腸桿菌顯色培養基平板上的菌落特征
挑取至少5個(gè)可疑菌落，不足5個(gè)時(shí)挑取全部可疑菌落，劃線(xiàn)接種于TSA平板。25℃±1℃培養48h±4h。
阪崎腸桿菌接種到TSA平板，有黃色素產(chǎn)生，培養結果如下圖所示：
圖4 阪崎腸桿菌在TSA平板上的菌落特征
3.2.3 鑒定
自TSA平板上直接挑取黃色可疑菌落，進(jìn)行生化鑒定�？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統。
阪崎腸桿菌氧化酶為陰性，2min內不變色，結果如下圖所示：
圖4 阪崎腸桿菌氧化酶試驗結果
阪崎腸桿菌接種至HBI阪崎腸桿菌生化鑒定條（GB），結果如下圖所示：
圖5 阪崎腸桿菌在HBI阪崎腸桿菌生化鑒定條（GB）上的結果
克羅諾桿菌屬的主要生化特征見(jiàn)下表。
表1 克羅諾桿菌屬的主要生化特征
|
生化試驗 |
特征 |
|
|
黃色素產(chǎn)生 |
+ |
|
|
氧化酶 |
- |
|
|
L-賴(lài)氨酸脫羧酶 |
- |
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L-鳥(niǎo)氨酸脫羧酶 |
（+） |
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|
L-精氨酸雙水解酶 |
+ |
|
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檸檬酸水解 |
（+） |
|
|
發(fā)酵 |
D-山梨醇 |
（-） |
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L-鼠李糖 |
+ |
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D-蔗糖 |
+ |
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D-蜜二糖 |
+ |
|
|
苦杏仁甙 |
+ |
|
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注：+>99%陽(yáng)性；->99%陰性； （+）90%~99%陽(yáng)性；（-）90%~99%陰性。 |
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3.3結果與報告
綜合菌落形態(tài)和生化特征，報告每100 g（mL）樣品中檢出或未檢出克羅諾桿菌屬。
第二法克羅諾桿菌屬的計數
3.4操作步驟
3.4.1 樣品的稀釋
固體和半固體樣品：無(wú)菌稱(chēng)取樣品100g、10g、1g各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分溶解，制成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
液體樣品：以無(wú)菌吸管分別取樣品100mL、10mL、1mL各三份，分別加入900mL、90mL、9mL已預熱至44℃的BPW，輕輕振搖使充分混勻，制成1:10樣品勻液，置36℃±1℃培養18h±2h。分別移取1mL轉種于10mL mLST-Vm肉湯，44℃±0.5℃培養24h±2h。
3.4.2 分離、鑒定
同3.2.2和3.2.3。
3.5結果與報告
綜合菌落形態(tài)、生化特征，根據證實(shí)為克羅諾桿菌屬的陽(yáng)性管數，查MPN檢索表，報告每100g（mL）樣品中克羅諾桿菌屬的MPN值（見(jiàn)下表）。
表2 克羅諾桿菌屬最可能數（MPN）檢索表
相關(guān)標準：
GB 4789.40-2016 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗 點(diǎn)擊下載
注:本文屬海博生物原創(chuàng ),未經(jīng)允許不得轉載。
