大腸埃希氏菌生化鑒定解析

一、參考標準

  根據《GB4789.38-2012 大腸埃希氏菌計數》中定義，大腸埃希氏菌廣泛存在于人和溫血動(dòng)物的腸道中，能夠在44.5℃發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，IMViC（靛基質(zhì)、甲基紅、VP試驗、檸檬酸鹽）生化試驗為＋＋－－或－＋－－的革蘭氏陰性桿菌。

二、生化驗證

  1、從分離平板中挑取可疑菌落，接種至乳糖發(fā)酵培養基（或EC肉湯培養基），44.5℃培養24h，觀(guān)察實(shí)驗結果。典型的大腸埃希氏菌在乳糖發(fā)酵培養基中產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養基由紫色變?yōu)辄S色，導管中有氣體，有時(shí)液面處可見(jiàn)大量氣泡（在EC肉湯中可觀(guān)察到導管內有氣體產(chǎn)生）。

乳糖發(fā)酵培養基試驗現象

備注：a為大腸埃希氏菌ATCC25922，b為乙型副傷寒沙門(mén)氏菌，c為大腸埃希氏菌CMCC44102，d為空白對照

  2、從分離平板中挑取疑似菌，進(jìn)行IMViC生化實(shí)驗，接種至蛋白胨水、MR-VP、西蒙氏枸櫞酸鹽培養基（可選用大腸桿菌鑒定條或成套生化鑒定管等），36±1℃培養24-48h，記錄生化反應結果。大腸埃希氏菌IMViC試驗為＋＋－－或－＋－－（大多數大腸埃希氏菌反應為＋＋－－，－＋－－反應的大腸埃希氏菌較為少見(jiàn)）。

  注：靛基質(zhì)試驗需在培養結束后，在蛋白胨水中滴加靛基質(zhì)試劑，立即或數秒內出現玫紅色環(huán)為陽(yáng)性反應，黃色環(huán)為陰性反應；甲基紅試驗需在培養結束后，在MR-VP培養基中滴加甲基紅試劑，立即顯紅色為陽(yáng)性反應，橙黃色為陰性反應；V-P試驗需在培養結束后滴加V-P試劑，繼續培養0.5-4h，如出現變紅現象即為陽(yáng)性反應，不變紅為陰性反應；西蒙氏枸櫞酸鹽可直接觀(guān)察結果，如出現變藍即為陽(yáng)性反應，不變色為陰性反應。

  3、革蘭氏染色。在挑取疑似菌落后對其疑似菌落進(jìn)行革蘭氏染色（革蘭氏染色液方法 點(diǎn)擊查看相關(guān)文章），大腸埃希氏菌為革蘭氏陰性桿菌，革蘭氏染色結果為紅色短桿菌。

革蘭氏染色液微生物質(zhì)控結果 

備注：紅色桿菌為大腸埃希氏菌，紫色球菌為金黃色葡萄球菌

三、結果判定

  若待測菌能夠在44.5℃發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并且同時(shí)滿(mǎn)足IMViC（靛基質(zhì)、甲基紅、VP試驗、檸檬酸鹽）生化試驗為＋＋－－或－＋－－的革蘭氏陰性桿菌，即可判定為大腸埃希氏菌。

四、注意事項

  極少數不活躍大腸埃希氏菌為乳糖遲緩發(fā)酵或不發(fā)酵類(lèi)型，在乳糖發(fā)酵培養基或EC肉湯培養基中觀(guān)察不到產(chǎn)酸產(chǎn)氣現象，需結合其他生化反應進(jìn)行判斷。

  注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。

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