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一、試驗原理：
用于細菌的革蘭氏染色試驗。
通過(guò)結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì )出現縫隙，因此，能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
二、培養基配方（g/L）：
革蘭氏染色液A液：
|
結晶紫 1.0g |
95%乙醇 |
20.0ml |
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1%草酸銨水溶液 |
80.0ml |
|
碘 |
1.0g |
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碘化鉀 |
2.0g |
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蒸餾水 |
300ml |
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95%乙醇 |
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沙黃 |
0.25g |
|
95%乙醇 |
10.0ml |
|
蒸餾水 |
90.0ml |
三、試驗方法：
1.如果樣品來(lái)自肉湯培養物：挑取1-2環(huán)肉湯培養基至潔凈載玻片上，不需要涂布開(kāi)，在空氣中自然干燥樣品液。如果樣品來(lái)自平板培養物：用接種環(huán)挑取1環(huán)蒸餾水至潔凈載玻片上，挑取一個(gè)單菌落，與蒸餾水混合均勻，涂布于載玻片上，盡可能涂布均勻，且不要太厚，空氣中自然干燥菌液。
2.涂布經(jīng)火焰固定，加（結晶紫溶液）溶液A染1分鐘，水洗。
3.加（碘液）溶液B染色1分鐘，水洗。
4.加（脫色液）溶液C，不時(shí)搖動(dòng)載玻片約10-30秒，至無(wú)紫色脫落為止，水洗。
5.加（復染液）溶液D,染1分鐘，水洗。
6.干后油鏡鏡檢。革蘭氏陽(yáng)性菌呈暗紫色至紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色至淡紅色。
四、結果觀(guān)察與解釋
接種以下質(zhì)控菌株：
|
質(zhì)控菌株 |
菌株編號 |
實(shí)驗結果 |
鏡檢菌落顏色 |
|
金黃色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
G+ |
紫色 |
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大腸埃希氏菌 |
ATCC25922 |
G- |
紅色 |
革蘭氏染色液微生物質(zhì)控結果：
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
相關(guān)產(chǎn)品：
革蘭氏染色液試劑盒-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
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