培養基的加熱滅菌操作
培養基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理,通常來(lái)說(shuō)使用最多的是壓力蒸汽滅菌法,但對于某些培養基(xld sc 等)來(lái)說(shuō),高壓條件會(huì )破壞培養基中的某些成分,因此只能采用加熱滅菌的方式進(jìn)行處理。
一、固體培養基的加熱滅菌(以XLD培養基為例)
1.準確稱(chēng)取200ml培養基的量11.4g,加入到裝有210ml去離子水(10ml為5%的水分損耗)的搪瓷缸中,用玻璃棒攪拌至無(wú)干粉完全溶解。
2.將搪瓷缸置于電磁爐上,一邊加熱,一邊攪拌,當液面完全沸騰后,立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開(kāi),算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回電磁爐,重復上面的步驟,總共煮沸4-6次即可。
二、液體培養基的加熱滅菌(以SC培養基為例)
液體培養基的稱(chēng)量溶解過(guò)程都和固體加熱滅菌的操作方法一樣,不同的是在微波爐上加熱至微微沸騰后需迅速置于冰水中降溫,待其完全冷卻后分裝至無(wú)菌試管備用。
這是因為SC液體培養基中含有亞硒酸氫鈉,過(guò)分加熱會(huì )使其分解,導致培養基選擇性下降,影響實(shí)驗結果判斷,因此只能輕微加熱。
正常加熱滅菌的SC培養基,為淡黃色澄清透亮的液態(tài)。過(guò)分加熱滅菌的SC培養基,為紅色液態(tài),此時(shí)則不能使用。