梭菌(Clostridium)是一類(lèi)與人類(lèi)關(guān)系非常密切的細菌。其中既有許多致病菌，如產(chǎn)生外毒素的破傷風(fēng)梭菌和肉毒梭菌等；也有一些具有重要工業(yè)應用價(jià)值或潛力的梭菌，如丙酮丁醇梭菌和熱纖梭菌等。
基因失活或基因刪除是細菌功能基因組學(xué)研究的基本手段。近年來(lái)，基于乳酸乳球菌II型內含子剪切機制開(kāi)發(fā)的梭菌內含子系統，顯著(zhù)提高了梭菌基因插入失活的效率。但若要在梭菌中通過(guò)雙交換同源重組來(lái)刪除基因，仍然非常困難，鮮有成功案例。
中科院微生物研究所的賈開(kāi)志博士與其合作導師李寅研究員受到II型內含子可高效插入梭菌基因組的啟發(fā)，設計了一個(gè)將逆轉錄轉座與同源重組結合起來(lái)的基因刪除策略。這一策略的第一步是在II型內含子的下游引入與擬刪除基因上游同源的一段序列（簡(jiǎn)稱(chēng)為同源序列）；第二步是通過(guò)逆轉錄轉座作用，將攜帶有同源序列的II型內含子插入梭菌基因組；第三步是篩選單交換同源重組的基因型，獲得目標基因、操縱元或基因簇得以刪除的突變株。
采用這一新策略，研究人員對位于丙酮丁醇梭菌染色體及大質(zhì)粒上的兩個(gè)操縱元進(jìn)行了有效刪除。他們將這一策略稱(chēng)為“II型內含子錨定的基因刪除”——通過(guò)II型內含子的高效逆轉錄轉座作用，增加了II型內含子攜帶的同源序列與基因組DNA發(fā)生同源重組的可能性。理論上，只要能夠應用II型內含子插入失活系統的梭菌（甚至其他細菌），都可以采用這一策略來(lái)實(shí)現基因刪除。
（來(lái)源：微生物所）
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