飼料在加工、儲運過(guò)程中極易受霉菌污染，飼料一旦霉變，不僅其營(yíng)養價(jià)值會(huì )降低，適口性差，而且霉菌毒素會(huì )直接危害動(dòng)物和人類(lèi)的健康，甚至導致死亡，因此霉菌及霉菌毒素污染所造成的損失已引起人們的高度重視。霉菌不是一個(gè)分類(lèi)學(xué)上的名稱(chēng)，而是某些絲狀真菌的俗稱(chēng)，指在基質(zhì)上長(cháng)成具有絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀的菌絲體的真菌，一般泛指毛霉、根霉、曲霉、青霉、鐮刀菌等屬真菌。近年來(lái)世界各國紛紛制訂霉菌及霉菌毒素的限量標準，同時(shí)加強對霉菌檢測技術(shù)的研究，并不斷完善該項技術(shù)。我國在GB13078-91中公布了對我國部分飼料原料中霉菌總數的允許量、限用量，檢測方法依照GB13092-91，但在實(shí)際檢驗工作中，發(fā)現了不少問(wèn)題。飼料生態(tài)區系具有多樣性和復雜性的特點(diǎn)，我國飼料中霉菌污染又比較普遍，因此對霉菌檢測方法的研究具有重要的現實(shí)意義。本文根據檢驗中出現的問(wèn)題，結合國內外有關(guān)研究的最新進(jìn)展，對霉菌檢測的接種方式、培養時(shí)間等問(wèn)題作幾點(diǎn)探討。
接種方式常用的微生物接種方式主要有傾注法和涂布法兩種。目前國標方法中采用傾注法，然而有實(shí)驗和報道證實(shí)，霉菌計數采用涂布法更合適。對霉菌計數來(lái)說(shuō)，涂布法有以下幾方面優(yōu)越于傾注法：①在操作上更容易：傾注法要求將培養基熔化之后涼至45℃再注入培養皿中，但實(shí)際上在稀釋菌液的同時(shí)，很難控制溫度。如果培養基溫度太高則可能使霉菌孢子受熱損傷甚至死亡，同時(shí)如果樣品已經(jīng)稀釋而培養基溫度仍很高，則有可能使稀釋液保持時(shí)間太長(cháng)。如果溫度太低時(shí)傾倒，培養基會(huì )凝固。如果在大批量進(jìn)行檢驗時(shí)，則更難于掌握溫度。②涂布法培養所需的時(shí)間較短，培養出的霉菌菌落數較多，霉菌孢子、菌落形態(tài)特征發(fā)育完全，便于鑒定。這是因為絕大多數霉菌是好氧的，在培養基表面生長(cháng)快，發(fā)育好，而混在培養基中發(fā)育就受影響。③由于涂布法是先倒好培養基，后接種，因而可以知道培養基是否染上雜菌。因此，霉菌計數采用涂布法既準確又省時(shí)。
培養時(shí)間對飼料霉菌的檢測時(shí)間，國標中采用培養3天后開(kāi)始觀(guān)察，應培養觀(guān)察1周。我們發(fā)現，正常培養條件下，許多樣品在培養3天后已經(jīng)無(wú)法準確計數，尤其是含有生長(cháng)特別快、菌絲很多的菌如毛霉、根霉、木霉等樣品和濕度較大的樣品時(shí)，則必須提早觀(guān)察記錄，在48小時(shí)以?xún)扔嫈�，否則菌絲就會(huì )覆蓋整個(gè)平皿，無(wú)法準確計數。實(shí)驗發(fā)現，培養3天～4天的菌落數與5天～7天的基本相同，因此，飼料中霉菌計數，培養2天就應開(kāi)始觀(guān)察，如果只是計數，培養2天～4天已基本達到目的，但如果還要進(jìn)一步分類(lèi)鑒定，則需要培養更長(cháng)的時(shí)間（7天～14天）。
培養基國標中霉菌檢測使用的是高鹽察氏培養基（CAO），這種培養基僅適合于高滲性霉菌生長(cháng)，所以嚴格說(shuō)來(lái)，在此培養基中生長(cháng)的菌數并不是真正的霉菌總數。但由于飼料中產(chǎn)生毒素的真菌，主要是曲霉屬、青霉屬和鐮刀菌屬，其中許多菌種是適應高滲的，因此，選用高鹽察氏培養基還是具有一定代表性的。有時(shí)為了確切地反映樣品中真菌的全貌，還可同時(shí)選用低滲性培養基，如馬鈴薯葡萄糖培養基；為了分離某種類(lèi)型或特定的產(chǎn)毒真菌，也可用選擇性培養基。
培養溫度國標中采用的溫度為25℃～28℃±1。大多數霉菌的最適生長(cháng)溫度為25℃～30℃，但一些產(chǎn)曲霉毒素的菌株則需要更高的溫度，如黃曲霉最適生長(cháng)溫度為35℃，構巢曲霉為33℃，煙曲霉為37℃，因此，培養溫度應根據實(shí)際情況做適當調整。
計數范圍霉菌菌落由孢子和菌絲組成，相當擴散，在直徑9厘米的平皿里，菌落數稍多就相互交叉重疊，影響計數，但數量太少又會(huì )產(chǎn)生較大的誤差，因此選擇適當的稀釋度計數是保證結果準確的關(guān)鍵環(huán)節之一。在實(shí)驗中發(fā)現，國標中計數范圍中采用30個(gè)～100個(gè)顯然不太合適，大部分飼料樣品檢測中含50個(gè)～100個(gè)菌落已較難計數，因此，應盡量選擇每平皿10個(gè)～50個(gè)的稀釋度進(jìn)行霉菌計數。而對含有菌絲很豐富、菌落特別擴散的毛霉、根霉、犁頭霉等菌株，則應在更少的范圍內計數（每平皿30個(gè)以?xún)龋�，以確保計數的準確性。霉菌檢測中應注重對污染菌相的分析
霉菌種類(lèi)很多，但能產(chǎn)生霉菌毒素的只限于少數的產(chǎn)曲霉毒素，而產(chǎn)毒菌種也只有少量菌株能產(chǎn)生具有危險性數量的霉菌毒素，因此僅對霉菌總數進(jìn)行檢測并不能全面反映其危害程度，重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判斷被污染的飼料的安全程度。關(guān)于我國飼料中的菌相分析，這些年來(lái)已初步取得結果，我國飼料（糧）中常污染的霉菌有黃曲霉、雜色曲霉、變異曲霉、米根霉、青霞等，其中尤以黃曲霉和雜色曲霉為常見(jiàn)。國外有些研究者設計出各類(lèi)選擇性培養基，可以識別產(chǎn)毒的霉菌。如AFPA培養基（配方：酵母提取汁20克，蛋白胨10克，檸檬酸鐵銨0．5克，0．2％二氯硝基本胺1.0毫升，瓊脂15克，0.2％二氯硝基苯胺1.0毫升，pH值為5．6）可以用于分離黃曲霉毒素產(chǎn)生菌。產(chǎn)黃曲霉毒素的菌株黃曲霉和寄生曲霉在A(yíng)FPA上30℃培養2天～3天就形成背面有亮橙黃色的特征性菌落，非常容易識別。有人利用該培養基分離黃曲霉高污染食品花生、玉米等，取得了滿(mǎn)意的結果。因此，針對不同樣品，有目的地設計出相應的選擇性培養基，以篩選污染菌中的危險菌群，將是一個(gè)值得探索的方向。
總結培養時(shí)間：為避免飼料樣品中含有生長(cháng)特別快、菌絲很多的菌，霉菌計數必須在48小時(shí)以?xún)乳_(kāi)始觀(guān)察，否則菌絲就會(huì )覆蓋整個(gè)平皿，無(wú)法準確計數；如果只作霉菌計數，培養2天～4天已基本達到目的；如果要進(jìn)一步分類(lèi)鑒定，則需要培養更長(cháng)的時(shí)間(7天～14天）。
接種方式：霉菌接種采用涂布法比傾注法更合適。
計數范圍：應盡量選擇每平皿10個(gè)～50個(gè)的稀釋度進(jìn)行霉菌計數。而對菌絲很豐富、菌落特別擴散的菌株，則應在更少的范圍內計數（30個(gè)1平皿以?xún)龋?br> 培養溫度（25℃～28℃±1）已經(jīng)可以滿(mǎn)足要求，特殊來(lái)源的飼料應根據實(shí)際情況做適當調整。
僅對霉菌總數進(jìn)行檢測并不能全面反映其危害程度，更重要的是要知道污染菌的菌相，才能更好地判斷被污染飼料的安全程度。
（來(lái)源：三農在線(xiàn)網(wǎng)）
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