微生物檢測中菌懸液不會(huì )制備，化驗結果怎么能保證準確？

    對于微生物實(shí)驗室的小伙伴們來(lái)說(shuō)，每天除了面對接樣，檢測樣品，配培養基等各種瓶瓶罐罐交響曲以外，制備合適濃度的菌懸液應該是每天的頭號大事了，畢竟有太多的項目需要合適濃度的菌懸液，產(chǎn)品方法適用性，培養基促生長(cháng)測試，最要命的是每天產(chǎn)品檢測中的陽(yáng)性對照菌菌懸液的制備。

    小編今天就給大家分享一篇文章。

    這里以大家最常用的大腸埃希菌為例，其它菌種方法類(lèi)似。

    從菌種保藏管中吸取少量菌液，轉接到新鮮的TSB中，于30℃-35℃培養箱中培養18-24小時(shí)。

    ②稀釋?zhuān)?/span>  

    取步驟1的培養物1ml，加入到9ml的pH7.0 氯化鈉蛋白質(zhì)緩沖液中，進(jìn)行倍比稀釋。

    ③平板計數：

    取稀釋好的菌液，一般取3個(gè)稀釋級，每個(gè)梯度取2ml，分別加入兩塊90cm的平皿中，每皿加入1ml菌液，傾注45℃左右的已經(jīng)經(jīng)過(guò)確定的TSA培養基，輕輕搖勻，靜置，培養基凝固后，置30-35℃培養箱中倒置培養48小時(shí)。

    ④菌落計數：

    將培養后的平板，置于菌落計數器下進(jìn)行菌落計數，以確定哪個(gè)稀釋級的濃度能夠滿(mǎn)足測試的要求。

    2.注意事項：

    菌種制備：

    也可以使用TSA平板進(jìn)行培養，如果轉接的是冷凍保藏管中的菌，最好再轉接一次，使用第二次轉接的菌種。

    稀釋?zhuān)?/span>

    取菌液的時(shí)候，需要先對菌液進(jìn)行振蕩或吹打混勻，方可吸取菌液�？梢圆挥眠M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)�只要能保證最后加入到測試樣品中的菌的數量符合要求即可。

    平板計數：

    取菌液時(shí)同樣需要先將試管中的菌液進(jìn)行混勻。

    培養基菌落計數：

    不建議逐日觀(guān)察結果，因為平板中可能有凝集水， 逐日觀(guān)察拿動(dòng)平板，可能會(huì )導致水落到菌落上，菌跟著(zhù)水流到下一個(gè)空白地方，導致結果不準確；另外如果是霉菌，因為有孢子，拿動(dòng)也會(huì )導致孢子落到平板空白地方，影響結果。

    3.事后思考：

    ①菌液的使用：

    菌懸液使用有時(shí)效性要求

    2015版<中國藥典>和<歐洲藥典>8.0版要求如果放置在室溫，菌懸液必須在2小時(shí)內使用，如果放置在2-8℃保存，可以在24小時(shí)內使用。

    那么問(wèn)題來(lái)了，菌懸液的菌的數量需要在48小時(shí)后才能確定，但是在24小時(shí)之內菌懸液必須使用，所以在不知道菌含量的情況下，樣品測試需要做至少三個(gè)梯度。

    筆者之前在微生物實(shí)驗室做了5次的菌懸液制備，為了保證實(shí)驗的成功，每次都是要做三個(gè)梯度，雖然大多數都是同一個(gè)稀釋級的含量符合要求，但是還是偶爾有另一個(gè)稀釋級才符合要求的時(shí)候，所以筆者每次都乖乖的做三個(gè)梯度的測試，還好筆者那個(gè)時(shí)候依據的法規中，日常的無(wú)菌檢查和控制菌檢查中沒(méi)有陽(yáng)性對照的要求。

    這里說(shuō)的三個(gè)梯度不是說(shuō)只是計數，而是菌懸液實(shí)際運用的測試中也需要三個(gè)梯度，舉個(gè)例子，某個(gè)無(wú)菌產(chǎn)品無(wú)菌檢查中的陽(yáng)性對照測試，需要做三個(gè)對照。當然，同樣的產(chǎn)品方法適用性，培養基促生長(cháng)測試也是如此。流程圖如下：

    ②步驟的繁瑣：

    這個(gè)流程圖中，還是省略了一些步驟，一句話(huà)帶過(guò)的倍比稀釋?zhuān)�做過(guò)的小伙伴們知道，這個(gè)說(shuō)起來(lái)容易做起來(lái)難。

    另外在接收菌種和從冷凍保藏管中取出菌種來(lái)使用時(shí)，還需要進(jìn)行相應的鑒定，所以不要覺(jué)得這個(gè)流程好冗長(cháng)，其實(shí)已經(jīng)是簡(jiǎn)單版的。

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