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微生物菌體形態(tài)觀(guān)察是微生物學(xué)基本操作。菌體形態(tài)的檢查過(guò)程一般經(jīng)過(guò)涂片、染色和顯微鏡檢�？傮w而言，微生物染色方法一般分為單染色法和復染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物，如乳酸酚棉蘭染色液，用于真菌的染色。復染色法是用兩種或以上染料，能協(xié)助鑒別微生物。常用法有革蘭氏染色法，還有鑒別細胞各部分結構如芽孢、鞭毛、莢膜等特殊染色法。
微生物染色方法各式各樣，本文著(zhù)重介紹
1) 革蘭氏染色法
2) 乳酸酚棉藍染色法
3) 芽孢染色法
4) 鞭毛染色法
5) 莢膜染色法。
一、革蘭氏染色法
1 操作步驟
革蘭氏染色法，是指細菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。不僅能觀(guān)察到細菌的形態(tài)而且還可將所有細菌區分為兩大類(lèi)：染色反應呈藍紫色的稱(chēng)為革蘭氏陽(yáng)性細菌，用G＋表示，染色反應呈紅色（復染顏色）的稱(chēng)為革蘭氏陰性細菌，用G-表示。細菌對于革蘭氏染色的不同反應，是由于它們細胞壁的成分和結構不同而造成的。革蘭氏陽(yáng)性細菌的細胞壁主要是由膚聚糖形成的網(wǎng)狀結構組成的，在染色過(guò)程中，當用乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結構中的孔徑變小，通透性降低，使結晶紫一碘復合物被保留在細胞內而不易脫色，因此，呈現藍紫色；革蘭氏陰性細菌的細胞壁中膚聚糖含量低，而脂類(lèi)物質(zhì)含量高，當用乙醇處理時(shí)，脂類(lèi)物質(zhì)溶解，細胞壁的通透性增加，使結晶紫一碘復合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復染液（番紅）的顏色，因此呈現紅色。
一般挑選16-24h內的新鮮培養物進(jìn)行。鏡檢應采用油鏡進(jìn)行，放大倍數為1000倍。
涂片：將培養的不同菌分別作涂片（注意涂片切不可過(guò)于濃厚），干燥、固定。固定時(shí)通過(guò)火焰1-2 次即可，不可過(guò)熱，以載玻片不燙手為宜。
初染：加結晶紫液蓋滿(mǎn)標本處，染一分鐘后水洗，并將玻片上積水輕輕甩凈。
媒染：加碘液蓋滿(mǎn)標本處，1分鐘后水洗，甩凈玻片上積水。
脫色：加95%酒精蓋滿(mǎn)標本，輕輕搖動(dòng)玻片，約20秒鐘后水洗、甩干。
復染：加稀釋石炭酸復紅液或沙黃溶液1-2滴蓋滿(mǎn)標本，染30秒鐘后水洗，待標本自干或用吸水紙印干。
觀(guān)察：鏡檢干燥后置油鏡觀(guān)察，革蘭氏陰性菌呈紅色，革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。以分散開(kāi)的細菌的革蘭氏染色反應為準，過(guò)于密集的細菌，常常呈假陽(yáng)性。
細菌有三種基本形態(tài)，即球形、桿形和螺旋形，分別稱(chēng)為球菌、桿菌和螺形菌。具體如圖1所示：
圖1. 細菌菌體特征
1.微球菌 2.葡萄球菌 3.雙球菌 4.鏈球菌 5.四聯(lián)球菌 6.八疊球菌 7.桿菌 8.球菌 9.鏈桿菌 10.梭狀桿菌
11.棒狀桿菌 12.芽孢桿菌 13.破傷風(fēng)棱菌 14.弧菌 15.螺菌 16.莢膜 17.菌鞭毛
二、乳酸酚棉藍染色法
1 操作步驟
染色：于潔凈載玻片上，滴1-2滴乳酸酚棉藍染色液，用解剖針從霉菌菌落的邊緣外取少量帶有 孢子的菌絲置于染色液中，再細心地將菌絲挑散開(kāi)，然后小心地蓋上蓋玻片，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀(guān)察，必要時(shí)再換高倍鏡。
觀(guān)察：染好后的標本片用顯微鏡觀(guān)察結果，酵母菌細胞、菌絲體和產(chǎn)孢結構等皆可被染成亮藍色；背景為暗淡的藍色。
圖2. 乳酸酚棉藍染色實(shí)物圖
圖3 曲霉菌體形態(tài)圖
1.分生孢子 2.次生小梗 3.初生小梗 4.頂囊 5.分生孢子梗 6.足細胞
三、芽孢染色法
1 操作步驟
一般革蘭氏染色只能把芽孢周?chē)募毎|(zhì)染色，不能直接把芽孢染上，故芽孢會(huì )透亮，能夠觀(guān)察到芽孢。若不清晰可進(jìn)一步采用芽孢染色法。
染色：用接種環(huán)取菌樣涂布于玻片上，待自然干燥。而后通過(guò)火焰加熱將菌固定于玻片上。將涂片放入平皿內，片上放兩層濾紙，滴加足量的5.0%孔雀綠水溶液。將平皿蓋好，54℃-56℃水浴加熱30min。取出，去濾紙，用純化水沖洗殘留孔雀綠溶液。加0.5% 沙黃水溶液，染1min。水洗，待干后油鏡觀(guān)察。
觀(guān)察：染好后的標本片用顯微鏡觀(guān)察結果，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。
圖4.芽孢染色實(shí)物圖
許多細菌（如芽孢桿菌等）發(fā)育到某一階段，在細胞內形成一個(gè)圓形或橢圓形，抗逆性強的休眠體構造，稱(chēng)為芽孢。芽孢著(zhù)生的位置、形狀、大小因菌種不同而異。一般分為中央芽孢、末端芽孢、偏端芽孢、游離芽孢等。
圖5 細菌芽孢的各種類(lèi)型
四、莢膜染色法
莢膜(capsule)是某些細菌表面的特殊結構，是位于細胞壁表面的一層松散的粘液物質(zhì)，莢膜的成分因不同菌種而異，主要是由葡萄糖與葡萄糖醛酸組成的聚合物。
涂片：按常規法涂片，可多挑些菌體與水充分混合，并將粘稠菌液盡量涂開(kāi)，涂布面積不宜過(guò)大。
干燥：在空氣中自然干燥。
染色：用溶液A染5-7分鐘。
脫色：用溶液B洗去結晶紫，脫色要適度（沖洗2遍）。用吸水紙吸干，并立即加1-2滴香柏油于涂片處，以防止CuSO4結晶的形成。鏡檢。
觀(guān)察：背景藍紫色，菌體紫色，莢膜無(wú)色或淺紫色。
圖6 莢膜細菌結構圖
五、鞭毛染色法
長(cháng)在某些細菌菌體上細長(cháng)而彎曲的具有運動(dòng)功能的蛋白質(zhì)附屬絲狀物，稱(chēng)為鞭毛。許多細菌都是運動(dòng)的，通常使用鞭毛移向營(yíng)養物質(zhì)。鞭毛很薄，不易染色和觀(guān)察。
涂片：取幼齡細菌培養物制成涂片。
干燥：火焰干燥及固定。
染色：鞭毛染色液2-3滴，在室溫中染色2-3分鐘。
脫色：水洗，干燥后鏡檢（油鏡）。
觀(guān)察：菌體和鞭毛呈紫色。
圖5 蠟樣芽孢桿菌鞭毛染色圖
圖6 細菌鞭毛著(zhù)生方式
