過(guò)氧化氫酶（Catalase）試驗及注意事項

一、培養基和試劑

    培養基：普通瓊脂斜面或巧克力瓊脂平板培養基試劑：3%過(guò)氧化氫水溶液

二、試驗原理

    本試驗是通過(guò)檢查某些細菌是否產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶以作為生化鑒定指標之一。過(guò)氧化氫酶可將過(guò)氧化氫分解成水并釋放出分子氧，試驗中可產(chǎn)生大量氣泡。

三、試驗方法  將待試培養物移種于上述培養基，于36±1℃培養18-24h。

（1）平板法：挑取單個(gè)菌落，置于潔凈的載玻片上或小試管中，然后加入3%過(guò)氧化氫1-2滴，觀(guān)察有無(wú)氣泡產(chǎn)生。如有氣泡產(chǎn)生，判斷為陽(yáng)性（如圖1）。亦可在單個(gè)菌落上滴加1滴3%的過(guò)氧化氫，觀(guān)察有無(wú)氣泡（如圖2）。

圖1 載玻片上試驗結果

圖2 平皿菌落上試驗結果

（2）斜面法：于培養18-24h瓊脂斜面培養物表面加1ml3%過(guò)氧化氫，立即觀(guān)察有無(wú)氣泡產(chǎn)生。

四、注意事項

（1）本試驗使用過(guò)氧化氫的濃度食品檢驗GB統一要求為3%。

（2）本試驗不宜使用血瓊脂的培養物，因紅血球含有過(guò)氧化氫酶，可能造成假陽(yáng)性結果，所以只采用已將紅血球破壞的巧克力瓊脂培養基。

（3）必須使用新鮮培養物，不得應用超過(guò)72h的培養物。因為只有活的細菌才會(huì )有過(guò)氧化氫酶，老培養物可能引起假陰性或弱陽(yáng)性。

（4）挑取待試培養物，應使用白金針或環(huán)，不得使用含鐵金屬制成的接種針或接種環(huán)，因為微量的鐵的污染，也可造成假陽(yáng)性結果。

五、有關(guān)過(guò)氧化氫爆炸的一些說(shuō)明

    由于過(guò)氧化氫本身的不穩定性，遇有機物、金屬、受熱或見(jiàn)光都會(huì )分解生成氧氣。所以必須避光、低溫或常溫保存。

在使用過(guò)氧化氫試劑時(shí)，可能會(huì )有部分過(guò)氧化氫分解產(chǎn)生的氧氣積聚在試劑瓶的狹小空間內，導致瓶?jì)葰鈮狠^高。在掰開(kāi)瓶口時(shí)，有時(shí)會(huì )聽(tīng)到“撲”地一聲，偶爾會(huì )有類(lèi)似爆炸的聲音，甚至將瓶體炸裂或炸碎。所以，在掰開(kāi)瓶口時(shí)，尤其要注意安全：

（1）嚴格參考產(chǎn)品的保質(zhì)期，在保質(zhì)期內使用；

（2）穿好實(shí)驗服，帶實(shí)驗手套，做好常規防護；

（3）盡量在超凈臺等有防護罩的空間內掰開(kāi)試劑瓶，或者眼睛盡量遠離瓶口；

（4）為了更為保險，可以將試劑瓶置于小塑料袋中，在塑料袋的保護下掰開(kāi)瓶口，以免爆裂的玻璃瓶碎片四處灑落。

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