ONPG肉湯的原理和使用說(shuō)明

一、培養基用途和原理：

 ONPG培養基用于各類(lèi)革蘭氏陰性桿菌β－半乳糖苷酶的產(chǎn)生能力。也可用于鑒別遲緩發(fā)酵乳糖細菌與乳糖陰性細菌，還可將ONPG陽(yáng)性的蔥頭假單胞菌（Pseudomonas copacia）及嗜麥芽假單胞菌（Pseudomonas maltophila ）與其它假單胞菌區分開(kāi)。陽(yáng)性菌可使培養基變黃，故不宜用于檢測黃色細菌。

 該培養基的原理為，細菌分解乳糖依靠?jì)煞N酶的作用，一種是β－半乳糖苷酶滲透酶（βeta-galactosidase permease），它位于細胞膜上，可送乳糖分子滲入細胞。另一種為β－半乳糖苷酶（βeta-galactosidase），也稱(chēng)乳糖酶（Lactase），位于細胞內，能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

 具有上述兩種酶的細菌，能在24-48h發(fā)酵乳糖，而缺乏此兩種酶的細菌，不能分解乳糖，乳糖遲緩發(fā)酵菌只有β-D-半乳糖苷酶（胞內酶）而缺乏β－半乳糖苷酶滲透酶，因而乳糖進(jìn)入細菌細胞很慢，須經(jīng)培養基中１％乳糖較長(cháng)時(shí)間的誘導，產(chǎn)生相當數量的滲透酶后，才能較快分解乳糖，故呈現遲緩發(fā)酵現象。

 ONPG可迅速進(jìn)入細菌細胞，被半乳糖苷酶水解，釋放出黃色的鄰位硝基苯酚（O-nitrophenol,ONP），故由培養液變黃可迅速測知β－半乳糖苷酶的存在，從而確定該菌為乳糖遲緩發(fā)酵菌。

二、試驗結果判斷：

 接種微量新鮮培養物，35℃培養13小時(shí)，觀(guān)察結果。培養液變黃則為陽(yáng)性，如為陰性，繼續觀(guān)察至24h。

三、質(zhì)控菌株：

 陽(yáng)性菌株：大腸埃希氏菌

 陰性菌株：普通變形桿菌

四、使用說(shuō)明：

 （1）ONPG的優(yōu)點(diǎn)為水解作用快。在有較多乳糖苷酶存在的情況下，可在數分鐘內被水解而變黃。將較大量細菌培養物接種于小量ONPG培養基中，�？稍冢毙�時(shí)內獲得陽(yáng)性結果。

 （2）葡萄糖對β－半乳糖苷酶有一定的抑制作用，故應避免使用。

 （3）使用生長(cháng)于含乳糖培養基的細菌進(jìn)行接種，如三糖鐵瓊脂斜面上的培養物，可能加速試驗反應。

 （4）日本坂崎介紹，β－半乳糖苷酶和ONPG試驗反應不一定具有相關(guān)性。Leminor氏等用腸道菌研究了兩者的相關(guān)性，他講ONPG試驗陽(yáng)性菌分為兩群。ONPG＋β-gal＋群細菌的ONPG試驗在4小時(shí)內為強陽(yáng)性，但ONPG＋β-gal－群細菌的ONPG試驗較弱，而且緩慢變?yōu)殛?yáng)性。

 相關(guān)產(chǎn)品： 

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