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檢測過(guò)程中的注意事項：
1、在GB 4789.2的培養條件下所得結果，只包括一群在平板計數瓊脂上生長(cháng)發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數。
2、根據食品衛生標準要求和對樣品污染情況的估計，選擇2~3個(gè)稀釋度。加入樣品時(shí)要注意外來(lái)的污染。
3、為防止細菌增殖及產(chǎn)生片狀菌落，在加入樣液后，應在15min內傾注培養基。檢樣與培養基混勻時(shí)，可先向一個(gè)方向旋轉，然后再向相反方向旋轉。旋轉中應防止混合物濺到皿邊的上方。
4、培養基傾注的溫度與厚度是實(shí)驗正確與否的關(guān)鍵。（傾注的溫度：一般水浴和傾注溫度在46±1℃，溫度過(guò)高會(huì )造成已受損傷的菌細胞死亡，過(guò)低會(huì )導致瓊脂發(fā)生輕微凝固。厚度：直徑9cm的平皿一般要求15~20mL培養基，若培養基太薄，在培養過(guò)程中可能因水分蒸發(fā)而影響細菌的生長(cháng)）。培養基凝固后，應在盡快將平皿翻轉培養，保持瓊脂表面干燥，盡量避免菌落蔓延生長(cháng)，影響計數。
5、檢驗過(guò)程中還應該用稀釋液做空白對照，用以判定稀釋液、培養基、平皿或吸管可能存在的污染。同時(shí)，檢驗過(guò)程中應在工作臺上打開(kāi)一塊空白的平板計數瓊脂，其暴露時(shí)間應與檢驗時(shí)間相當，以了解檢樣在檢驗過(guò)程中有無(wú)受到來(lái)自空氣的污染。
6、每種不同樣品中的細菌都有一定的生理特性，培養時(shí)應用不同的營(yíng)養條件及生理條件可能得出不同的結果，因而應根據檢測標準的要求選擇適當的培養溫度和培養時(shí)間。
食品：36±１℃，48±2h 。
飲用水：36±１℃，48±2h 。
水產(chǎn)品（指原生態(tài)、未加工的水產(chǎn)品）：30±１℃，72±3h。(36℃培養和30℃培養結果差別較大，同樣水產(chǎn)品48h結果和72h也有差別。
7、有時(shí)檢樣的稀釋液中往往帶有食品顆粒（如奶粉、堅果），在這種情況下，為避免與細菌菌落混淆，可作一檢樣對照將稀釋液與PCA混合，不經(jīng)培養，置4℃環(huán)境放置，在計數時(shí)用于對照。
另外也可以在已熔化而保溫在46±1℃水浴內的平板計數瓊脂中，按100ml加1ml0.5%氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液，培養后食品顆粒不變色，細菌為紅色。
菌落計數注意事項：
1、如果高稀釋度平板上的菌落數比低稀釋度平板上的菌落數高，則說(shuō)明檢驗過(guò)程中可能出現差錯或樣品中含抑菌物質(zhì)，這樣的結果不可用于結果報告。
2、如果平板上出現鏈狀菌落，菌落間沒(méi)有明顯的界限，這可能是瓊脂與檢樣混勻時(shí)，一個(gè)細菌塊被分散所造成的。一條鏈作為一個(gè)菌落計。若培養過(guò)程中遭遇昆蟲(chóng)侵入，在昆蟲(chóng)爬行過(guò)的地方也會(huì )出現鏈狀菌落，也不應分開(kāi)計數。
3、如果平板上菌落太多，不能計數時(shí)，不建議采用多不可計作報告�？梢栽谧罡呦♂尪绕桨迳先我膺x取2個(gè)1cm2的面積，計算菌落數，除2求出每cm2面積內平均菌落數，乘以63.6(皿底面積cm2數)。
4、如果檢樣是微生物類(lèi)制劑（酸牛奶、酵母制酸性飲料等），在進(jìn)行菌落計數時(shí)應將有關(guān)微生物（乳酸菌、酵母菌）排除，不可并入檢樣的菌落總數內作報告。 每個(gè)樣品從開(kāi)始稀釋到傾注最后一個(gè)平板的時(shí)間不得超過(guò)15min,目的是為了使菌落能在平板上均勻分布，否則，時(shí)間放長(cháng)了，樣液可能由于干燥而貼在平板上，傾注瓊脂后不易搖開(kāi)，容易產(chǎn)生片狀菌落，影響菌落計數。另外，瓊脂凝固后不要在室溫長(cháng)時(shí)間放置，應及時(shí)將平皿倒置培養，可避免菌落的蔓延生長(cháng)。
結果計算注意事項:
1、若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內,計算兩個(gè)平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數,作為每g(mL)樣品中菌落總數結果。
2、N = ∑C/(n1 +0.1n2)d ……………………(1)
式中:
N ———樣品中菌落數;
∑C———平板(含適宜范圍菌落數的平板)菌落數之和;
n1 ———第一稀釋度(低稀釋倍數)平板個(gè)數;
n2 ———第二稀釋度(高稀釋倍數)平板個(gè)數;
d ———稀釋因子(第一稀釋度)。
示例:
N = ∑C/(n1 +0.1n2)d = (232+244+33+35)/[2+ (0.1×2)]×10-2 = 544/0.022=24727
表示為25000或2.5×104。
3、若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300CFU,則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。
4、若所有稀釋度的平板菌落數均小于30CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
5、若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(cháng),則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。
6、若所有稀釋度的平板菌落數均不在30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于30CFU 或大于300CFU 時(shí),則以最接近30CFU 或300CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
菌落總數的報告
1、菌落數小于100CFU 時(shí),按“四舍五入”原則修約,以整數報告。
2、菌落數大于或等于100CFU 時(shí),第3位數字采用“四舍五入”原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數;也可用10的指數形式來(lái)表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數字。
3、若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計數,則報告菌落蔓延。
4、若空白對照上有菌落生長(cháng),則此次檢測結果無(wú)效。
5、稱(chēng)重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告。
