常見(jiàn)微生物在常見(jiàn)選擇性培養基上的菌落特征

微生物培養，在選擇性分離培養基、顯色培養基上的菌落特征，皆由微生物生長(cháng)繁殖及代謝產(chǎn)物決定，培養基所含營(yíng)養物質(zhì)，皆為了滿(mǎn)足微生物生長(cháng)和代謝所需。

一、培養基簡(jiǎn)介：

    培養基是供微生物、植物和動(dòng)物組織生長(cháng)和維持用的人工配制的養料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養基還含有抗菌素和色素，用于各種微生物培養和鑒定。
    一般基礎培養基中含有蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸膏、氯化鈉、瓊脂等基本營(yíng)養萬(wàn)分。
    一些選擇、鑒定培養基根據用途不同，則需加入抑菌劑、指示劑、血液、糖等試劑，以利于需要菌的生長(cháng)與鑒別。
    一些需要使細菌大量生長(cháng)、繁殖的培養基，主要成分多為氨基酸、核苷酸、無(wú)機鹽、生長(cháng)因子等。
    瓊脂：是由石花菜或江籬(屬紅藻)中提取的一種藻膠，是由瓊脂糖和瓊膠質(zhì)組成的長(cháng)鏈多糖化合物。優(yōu)點(diǎn)在于不能被細菌分解利用，在細菌培養的溫度下凝膠強度穩定。
    蛋白胨：為動(dòng)物蛋白經(jīng)酶消化后產(chǎn)物，能為微生物提供C源、N源、生長(cháng)因子等營(yíng)養物質(zhì)。
    胰酪蛋白胨：是一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，亦稱(chēng)胰酶消化酪蛋白胨或胰蛋白胨。系采用酪蛋白經(jīng)胰酶消化后，濃縮干燥而成�？膳渲聘鞣N微生物培養基，用于細菌的培養、分離、增殖、鑒定，以及無(wú)菌試驗培養基、厭氧菌培養基等細菌生化特性試驗用培養基的配置。
    牛肉浸膏：是新鮮牛肉經(jīng)剔除脂肪，消化過(guò)濾濃縮得到的一種營(yíng)養物質(zhì)，含有肌酸、肌酸酐、多肽類(lèi)、氨基酸、核苷酸、有機酸、礦物質(zhì)及維生素的水溶性物質(zhì)。主要作用是為了補充蛋白胨以及其他氮源的營(yíng)養不足。
    酵母粉：富含B族維生素、有機氮以及碳水化合物等營(yíng)養物質(zhì)。
    膽鹽：是膽酸鈉鹽，是從動(dòng)物的膽汁中提取的一種混合物，含膽酸、結合膽酸以及膽汁醇等，膽鹽用在培養基中是作為選擇性抑制劑，主要抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng)。

    二、培養基分類(lèi)：
    按營(yíng)養物質(zhì)可分為：
    1、天然培養基：指一類(lèi)利用動(dòng)、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。如牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基等。 
    2、組合培養基：又稱(chēng)為合成培養基或綜合培養基，是一類(lèi)按微生物的營(yíng)養要求精確設計后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養基。如葡萄糖銨鹽培養基、淀粉硝酸鹽培養基等。 
    3、半組合培養基：一類(lèi)主要以化學(xué)試劑配制，同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養基。例如，馬鈴薯蔗糖培養基。
    按物理性狀分：
    1、液體培養基：一類(lèi)呈液態(tài)的培養基。
    2、固體培養基：一類(lèi)外觀(guān)呈固態(tài)的培養基。根據性質(zhì)又分為。固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態(tài)培養基、濾膜。 
    3、半固體培養基：指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養基。 
    4、脫水培養基：又稱(chēng)預制干燥培養基，指含有除水分外的一切成分的商品培養基。
    按功能性分為：
    1、選擇性培養基：一類(lèi)根據某微生物的特殊營(yíng)養要求或其對某化學(xué)、物理因素的抗性而設計的培養基，具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌的功能，廣泛用于菌種篩選等領(lǐng)域。 
    2、鑒別培養基：一類(lèi)在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應的指示劑，從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。例如，伊紅美藍乳糖培養基（EMB）。
    3、運輸培養基
    4、保存培養基
    5、復蘇培養基
    6、增菌培養基
    7、鑒定培養基
    8、多用途培養基

    三、培養基常用指示劑及變色范圍：

    四、幾種ISO、GB、SN常見(jiàn)選擇性培養基及顯色培養基的培養基配方及菌落特征分析：

大腸桿菌在結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）上的菌落特征

結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）

成分(g/L)：

蛋白胨               7.0

酵母粉               3.0

氯化鈉               5.0

乳糖                10.0

膽鹽                 1.5

結晶紫             0.002

中性紅              0.03

瓊脂                15.0

pH值7.4 ± 0.1      25℃

用法：

稱(chēng)取本品 41.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,煮沸不要超過(guò)2 分鐘。取適宜稀釋度樣品液 1ml,加入到無(wú)菌平皿中心,將冷至  45 ± 0.5℃ 的 VRBA 10-15ml傾注于平皿中。小心旋轉平皿將培養基與樣液充分混勻。凝固后，再加 3-4ml  VRBA 覆蓋平板表層 ,翻轉平板 ,置于36 ± 1℃培養 18-24 小時(shí)。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備,不得超過(guò)3 小時(shí)。

檢驗原理：
蛋白胨和酵母浸粉提供碳氮源、維生素、生長(cháng)因子和輔酶等其他營(yíng)養物質(zhì)；氯化鈉維持均衡的滲透；乳糖為可發(fā)酵碳水化合物，可作為一種能量來(lái)源；3 號膽鹽和結晶紫可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(cháng)；中性紅為指示劑；瓊脂是培養基的凝固劑。
微生物靈敏度：
接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24 小時(shí)。

典型特征：

大腸埃希氏菌在結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）上呈紫紅色菌落，可有沉淀環(huán)。

沙門(mén)氏菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）上的菌落特征

木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）

成分(g/L)：

酵母浸粉                  3.0

L-賴(lài)氨酸                  5.0

乳糖                    7.5

蔗糖                    7.5

木糖                    3.75

氯化鈉                   5.0

硫代硫酸鈉                  6.8

檸檬酸鐵銨                  0.8

去氧膽酸鹽                  2.5

苯酚紅                   0.08

瓊脂                    15.0

pH值7.4 ± 0.2                25℃

用法：

稱(chēng)取本品 57g,加熱攪拌溶解于 1000ml 蒸餾水中,不要過(guò)分加熱,冷至 50-55℃時(shí),傾入無(wú)菌平皿,部分開(kāi)蓋干燥 2h,然后蓋上,備用。無(wú)需高壓滅菌。在 24小時(shí)內使用。

檢驗原理：
酵母浸粉提供氮源、維生素、生長(cháng)因子； 氯化鈉維持均衡的滲透壓；木塘、乳糖、蔗糖為可發(fā)酵糖類(lèi)，產(chǎn)酸使苯酚紅指示劑變黃；去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，但不影響沙門(mén)氏菌的生長(cháng)；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原硫化氫，與檸檬酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵；瓊脂是培養基的凝固劑；苯酚紅為pH指示劑。

微生物靈敏度：
接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24 小時(shí)。

典型特征：

木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）中的酵母粉為細菌生長(cháng)提供維生素和輔助因子，木糖、乳糖和蔗糖作為可發(fā)酵的碳源。除志賀菌外，其他大多數腸桿菌均發(fā)酵木糖，加入的賴(lài)氨酸是為了鑒別沙門(mén)氏菌。沙門(mén)發(fā)酵木糖產(chǎn)酸，形成酸性環(huán)境有利于該菌產(chǎn)生脫羧酶，從而使培養基的pH升高向堿性轉變，但可因其他菌發(fā)酵乳糖和蔗糖產(chǎn)生大量的酸而中和，在堿性條件下，硫代硫酸鈉及檸檬酸鐵銨與沙門(mén)菌產(chǎn)生的硫代氫反應使菌落顏色呈黑色，酸性條件下下反應被抑制。酚紅作為指示劑，NaCl維持培養基滲透壓，去氧膽鹽鈉抑制一般革蘭陽(yáng)性菌生長(cháng)，也可抑制大腸桿菌生長(cháng)。。根據ISO和GB、FDA BAM方法，沙門(mén)菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸瓊脂（XLD）大多數可形成紅色帶黑心的菌落，約為2mm，光滑、濕潤、邊緣整齊。

備注：a:金黃色葡萄球菌 b:大腸埃希氏菌 c:福氏志賀氏菌 d:鼠傷寒沙門(mén)氏菌 e:腸炎沙門(mén)氏菌 f: 空白對照 

金黃色葡萄球菌在甘露醇高鹽瓊脂上的菌落特征：

甘露醇高鹽瓊脂

成分(g/L)：

蛋白胨               10.0

牛肉粉                1.0

D-甘露醇             10.0

氯化鈉               75.0

酚紅                0.025

瓊脂                 13.0

pH值7.4 ± 0.2      25℃ 

用法：

稱(chēng)取本品 109.0g,加入 1000ml蒸餾水中,加熱溶解并不停攪拌煮沸 1 分鐘。121℃高壓滅菌15 分鐘,冷至 45-50℃左右時(shí),傾入無(wú)菌平皿。

微生物靈敏度：
接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24 小時(shí)。

典型特征：
甘露醇高鹽瓊脂中的NaCl能夠抑制不耐鹽的非葡萄球菌生長(cháng)，D-甘露醇為碳源，酚紅指示劑，凝固酶陽(yáng)性菌能利用D-甘露醇產(chǎn)酸使酚紅由紅色變黃色。

阪崎腸桿菌在阪崎腸桿菌顯色培養基上的菌落特征

阪崎腸桿菌顯色培養基

胰蛋白胨                         15.0g 
大豆蛋白胨                        5.0g 
氯化鈉                            5.0g 
檸檬酸鐵按                        1.0g 
硫代硫酸鈉                        1.0g 
脫氧膽酸鈉                        1.0g 
5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡萄糖   0.1g 
瓊脂                               15g 
蒸餾水                          1000mL 
pH 7.3±0.2                       25℃
操作步驟：

1、用接種環(huán)接種mLST-Vm肉湯或EE肉湯增菌液10µl劃線(xiàn)或涂布于阪崎腸桿菌顯色平板上；

2、倒置放入培養箱36±1℃培養22-26h，典型的阪崎腸桿菌為藍-綠色菌落；

3、挑取典型菌落做生化試驗。

微生物靈敏度：
接種以下質(zhì)控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24 小時(shí)。

典型特征：

典型的阪崎腸桿菌為藍-綠色菌落,其它菌為無(wú)色、乳白色、黃色、黑色菌落。

阪崎腸桿菌生長(cháng)代謝時(shí)產(chǎn)生葡萄糖苷酶，與培養基中經(jīng)過(guò)酶切釋放出顯色基團，使菌體呈藍綠色菌落。

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