自然界中的很多微生物都具有產(chǎn)酶的特性,其中最常見(jiàn)的四種分別是過(guò)氧化氫酶、氧化酶、凝固酶和DNA酶。下面就這四種酶的檢驗方法做一下介紹。
1、過(guò)氧化氫酶實(shí)驗
很多細菌都可以產(chǎn)過(guò)氧化氫酶,過(guò)氧化氫酶能夠催化過(guò)氧化氫,釋放出氧氣,從而產(chǎn)生氣泡。檢驗方法是取3%過(guò)氧化氫溶液0.5ML,滴加于不含血液的細菌瓊脂培養基上,或者取1-3ML滴加到10ML的菌懸液中。如果培養物中出現氣泡則為陽(yáng)性。做過(guò)氧化氫酶實(shí)驗時(shí)要注意以下幾點(diǎn):1、細菌要新鮮。2因為紅細胞中含有過(guò)氧化氫酶,可能出現假陽(yáng)性,所以不能用血瓊脂平板做過(guò)氧化氫酶實(shí)驗。
2、氧化酶實(shí)驗
具有氧化酶的細菌,能夠氧化對苯二胺,生成有色的醌類(lèi)化合物。檢驗方法是取潔凈的濾紙一小塊,涂抹菌苔少許,滴加一滴10g/L對苯二胺溶液于菌落上,觀(guān)察顏色變化。如果立即呈粉紅色并迅速轉為紫紅色者為陽(yáng)性。做該類(lèi)實(shí)驗應注意不能采用在含葡萄糖培養基上生長(cháng)的菌落,因為葡萄糖發(fā)酵可抑制氧化酶的活性。
3、凝固酶實(shí)驗
金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生游離的凝固酶,從而使血漿凝固。檢驗方法是取兩支試管,分別加入0.5ML血漿(可適當稀釋?zhuān),挑取菌落加入到試管中,用已知的?yáng)性菌株作為對照,37攝氏度下水浴3-4小時(shí)。血漿凝固者為陽(yáng)性。
4、DNA酶實(shí)驗
某些細菌可產(chǎn)胞外DNA酶,DNA酶可以水解DNA長(cháng)鏈,形成的寡核苷酸可溶于酸,當在菌落平板上加入酸后,若在菌落周?chē)霈F透明環(huán),則表明該菌具有DNA酶。檢測方法是將待檢菌落點(diǎn)狀接種于DNA瓊脂平板上,35攝氏度培養18-24小時(shí),在細菌生長(cháng)物上加一層1MOL/L鹽酸(使菌落浸沒(méi)),如果菌落周?chē)霈F透明環(huán)則為陽(yáng)性,無(wú)透明環(huán)為陰性。需注意的是革蘭氏陽(yáng)性菌中只有金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生DNA酶,因此此方法可用來(lái)鑒定金黃色葡萄球菌。
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