細菌生化試驗—石蕊牛奶試驗

一、試驗原理

  石蕊是一種pH指示劑，在酸性溶液（pH≤4.5）呈紅色，在堿性（pH＞8.3）呈藍色，培養基本色應為紫藍色（4.5＜pH≤8.3）。同時(shí)石蕊也具有可還原的性質(zhì)，某些細菌能夠把石蕊還原成無(wú)色。

  牛奶中含有酪蛋白、乳蛋白、乳球蛋白和乳糖，某些含有凝乳酶的細菌可以使牛奶凝固，這些細菌通過(guò)使酪蛋白轉化成副酪蛋白，或者發(fā)酵乳糖產(chǎn)生大量酸使酪蛋白沉淀使牛奶凝固。

  還有些細菌產(chǎn)生脂酶，分解牛奶中的脂肪，形成黃色透明液體。

  另外，部分細菌具有酪蛋白水解酶，可催化酪蛋白水解，最終轉化成透明液體的酪蛋白原沉淀物，整個(gè)過(guò)程稱(chēng)為蛋白胨化。

二、培養基

  將奶粉充分溶化于水中,調至pH6.8，加入石蕊溶液直到呈現紫藍色（pH6.8),分裝試管，每管約5ml。于115℃滅菌10min，迅速冷卻，放冰箱中備用。

  石蕊溶液配制法：

  稱(chēng)取石蕊2.5g，放入缽中研碎，移放于盛有40%乙醇水溶液50ml的燒瓶中，煮沸1min，靜置約10min，吸取上清液移入另一燒瓶中，再加40%乙醇水溶液50 ml于原燒瓶中，再煮沸1min。將上清液加于前上清液中，將兩次上清液混合均勻，離心沉淀，將上清液倒入100ml量筒中，用40%乙醇補至100ml，滴加1ml鹽酸直至溶液呈現紫色，即為2.5%石蕊溶液。95%乙醇42.1ml加水至100ml即為40%乙醇溶液。

三、試驗方法

  以待試菌18-24h培養物接種，若為厭氧芽孢桿菌，應在培養基管中加入無(wú)菌鐵屑或鐵釘等，并加無(wú)菌凡士林等覆蓋，置36±1℃培養1-14天。

四、試驗結果判斷：

  1. 粉紅色：乳糖被發(fā)酵產(chǎn)酸；

  2. 紫藍色：乳糖為被發(fā)酵，保持原色；

  3. 藍色：堿性反應，乳糖為被發(fā)酵，細菌分解培養基中含氮物質(zhì)，產(chǎn)生堿性物質(zhì)；

  4. 白色：石蕊被還原；

  5. 澄清：牛奶蛋白被消化（胨化）；

  6. 凝塊會(huì )成凝乳：因大量產(chǎn)酸，牛奶蛋被被凝固；

  7. 產(chǎn)氣：乳糖被分解產(chǎn)酸產(chǎn)氣，強烈發(fā)酵可破壞凝塊。

五、注意事項

  如無(wú)脫脂奶粉，可將新鮮牛奶放冰箱過(guò)夜，除凈上面的奶油層，將脫脂奶置于流動(dòng)蒸汽加熱滅菌1h，冷卻到小于10℃，以滅菌紗布過(guò)濾，加石蕊溶液至淡紫色為止，分裝試管，滅菌同前。

  細菌對牛奶的作用如下表：

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