菌種活化的操作方法！

低溫保存管中之一般菌種臨時(shí)存放及活化

A. 低溫保存管之臨時(shí)存放及解凍中之一般菌種臨時(shí)存放及活化

1. 低溫保存管（cryo tube）應存放于－20℃ ~ －80℃之低溫條件下。

2. 準備 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以 37℃水浴取代，應避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架（可放置 cryo tube 之大�。�，液面不可高達管塞。

3. 將 cryo tube 從低溫保存條件中取出，置于 37℃浴槽之小試管架上。

4. 不斷輕微搖動(dòng) cryo tube，液面不可高至管塞，直至結冰完全溶解（約需 2 分鐘）。

1. 用無(wú)菌微量吸管，從已溶解之cryo tube 吸取 1-2滴之菌液，滴入固態(tài)指定培養基(培養基編號及溫度示于菌株訂購單)某一邊緣附近，以劃線(xiàn)法接種于培養基。

2.將接種好的培養基置于指定溫度的培養箱中培養。

1. 手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約5公分）燒至火紅，并不斷來(lái)回燒烤金屬固定桿之前約10公分，等待約10秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養基邊緣凝膠（無(wú)菌體部份），待接種環(huán)完全冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線(xiàn)，直到涵蓋1/3培養基為止（I區）。 

2. 灼燒接種環(huán)，待數秒冷卻后，旋轉培養基自I區涂布的邊緣再橫劃數條線(xiàn)到未接種的區域（II區）。

3. 重復2的動(dòng)作完成III 區與IV 區。

4. 灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。

D. 圖示

（1）金屬接種環(huán)

（2）平板劃線(xiàn)法

冷凍干燥管之開(kāi)管說(shuō)明

下列步驟請在無(wú)菌環(huán)境下操作：

 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之尖端。

 2、滴數滴無(wú)菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。

 3、取出隔熱纖維紙和內管，以滅菌過(guò)的鑷子取出內管之棉塞。

 4、( a ) 適用于細菌  用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液體培養基，滴入內管內，并輕微震蕩（可用該吸管協(xié)助），直到均勻懸浮。( b ) 適用于霉菌、酵母菌  用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無(wú)菌水，滴入內管內，待干燥粉末溶解后，以無(wú)菌吸管吸取并滴入約含有5ml無(wú)菌水之試管內，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。

 5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于指定的平板培養基上，做劃線(xiàn)分離培養或做成一系列之稀釋?zhuān)�用無(wú)菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入指定的液體培養基內，并依指定的溫度培養之。

 6、某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，遲滯期 ( lag period ) 較長(cháng)，必須等培養二倍時(shí)間后才能長(cháng)出，且再經(jīng)過(guò)一、二次繼代培養 (Subculture) 后才能正常生長(cháng)。經(jīng)過(guò)以上的努力后仍培養失敗，才視為不能活化。

 7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問(wèn)時(shí)，請于收到菌種之一個(gè)月內，以問(wèn)題菌株反應單傳真至本中心，即進(jìn)行處理。

 8．未開(kāi)封之冷凍干燥管，請冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。

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