硫酸新霉素微生物檢定法操作及注意事項

一、新霉素概述：

新霉素是由鏈霉菌經(jīng)發(fā)酵產(chǎn)生，與鏈霉素、卡那霉素，慶大霉素同屬于氨基糖苷類(lèi)抗生素。它由弗氏鏈霉菌產(chǎn)生；對革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌皆有效，以大腸桿菌最敏感，對金葡菌、炭疽桿菌、白喉桿菌、產(chǎn)氣桿菌、變形桿菌及痢疾桿菌等較敏感，對綠膿桿菌較不敏感。產(chǎn)品主要為新霉素B和C的混合物。新霉素與卡那霉素有完全交叉抗藥性，與鏈霉素有部分交叉抗藥性。

二、效價(jià)

按新霉素（C23H48N6O13）的量計，1mg=1000ug(效價(jià))，即1000新霉素單位相當于1mg的新霉素。硫酸新霉素的理論效價(jià)單位為676單位/mg（614.65/908.90=0.676）。

三、2015版中國藥典效價(jià)測定方法及注意事項

（1）方法：二劑量法，底層培養基20ml、菌層5ml，劑量范圍：4.0~25.0單位/ml。

（2）培養基：抗生素2號培養基（pH為7.8—8.0）

（3）菌種：金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003

（4）滅菌緩沖液：pH7.8的磷酸鹽緩沖液，內含3%氯化鈉。

（5）供試品的制備：由于本品極易溶解于水，故用水溶解樣品，再用緩沖液稀釋即可。

（6）培養溫度和時(shí)間：35-37℃,14-16h。

四、測定中的關(guān)鍵點(diǎn)及注意事項

（1）由于氨基糖苷類(lèi)抗生素硫酸鹽吸濕性較強，稱(chēng)量時(shí)應注意快速，并在稱(chēng)量前1-2h更換天平內干燥劑。從冰箱干燥器取出的標準品應放置室溫后稱(chēng)量。

（2）應預實(shí)驗菌量使得標準品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18—22mm。

（3）滴加試供液至牛津杯中的滴加時(shí)間不可過(guò)長(cháng)，因溶液的擴散時(shí)間會(huì )影響測定結果。

（4）培養時(shí)應注意雙碟的受熱均勻，雙碟疊放不可超過(guò)3層，避免受熱不均影響抑菌圈大小。

（5）由于劑量與抑菌圈直徑大小的直線(xiàn)斜率較大，試驗劑量所致抑菌圈直徑較小，故對提高靈敏度和重現性不利，因此可采取以下措施：一，試驗溶液滴入牛津杯后，在室溫條件下先放置一段時(shí)間再置于培養箱培養，可使抑菌圈增大。亦有報道，在培養前將雙碟置于冰箱放置比在常溫下放置更能提高靈敏度和擴大抑菌圈。二、新霉素能與瓊脂進(jìn)行物理結合，加入氯化鈉能使之逆轉，因此在試驗溶液中加入一定量的氯化鈉，可以顯著(zhù)增加新霉素在瓊脂中的擴散作用。試驗表明，抑菌圈的大小隨加入氯化鈉的濃度增大而增大，以加入3%為宜。但在試驗溶液中加入磷酸鹽或在培養基中含有氯化鈉等鹽類(lèi)，反而會(huì )使抑菌圈變小。三、提高緩沖液和培養基的pH值均能使抑菌圈直徑擴大，但過(guò)高的pH值不利于細菌生長(cháng)，會(huì )使抑菌圈邊緣不整齊，故一般以pH7.8-8.0為宜。

（6）硫酸新霉素片含量測定時(shí)，由于本品中含有對水不溶性輔料，在進(jìn)行含量測定前應充分研磨混勻后才能取樣。在溶解供試品時(shí)，須充分振搖提取，供試液中的輔料不必過(guò)濾除去，若采用過(guò)濾操作往往使結果偏低。

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