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一、試驗原理：
明膠液化（gelaune liquefaction）指細菌把明膠分解成液狀的現象。這是因為有些細菌具有明膠酶（亦稱(chēng)類(lèi)蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，使其失去凝膠性質(zhì)，從而使半固體的明膠培養基成為流動(dòng)的液體，即液化。這種能力因細菌種類(lèi)不同而有顯著(zhù)差異，因此很早以來(lái)就被作為鑒別、測定細菌的一種特征。例如：葡萄球菌屬、變形菌屬、芽孢桿菌屬均具有液化能力，而大腸桿菌就無(wú)這種液化能力。
該培養基中蛋白胨和牛肉膏粉為微生物生長(cháng)提供氮源、維生素、礦物質(zhì)；某些含明膠酶的細菌水解明膠，使其液化而降低明膠的膠凝作用。
二、 試驗方法：
a 稱(chēng)取適量明膠培養基(營(yíng)養明膠)，加入蒸餾水或去離子水，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝試管高層，116℃高壓滅菌15min，垂直放置待培養基凝固后，備用；
b 挑取18~24h待檢驗培養物，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度或點(diǎn)種于平板培養基；
c 于20~22℃培養7~14天。明膠高層亦可于36±1℃培養。
d 每天觀(guān)察結果，若因培養溫度高而使明膠本身液化時(shí)應不加搖動(dòng)、將接種物放于2—8℃約10—30min待降溫后取出觀(guān)察，若果確實(shí)被液化，即為試驗陽(yáng)性；平板試驗結果的觀(guān)察為在培養基平板點(diǎn)種的菌落上滴加試劑，若為陽(yáng)性，10~20min后，菌落周?chē)鷳霈F清晰帶環(huán)。否則為陰性。
三、臨床應用：
臨床上主要用于腸桿菌科細菌的鑒別，如沙雷菌、普通變形桿菌、奇異變形桿菌、陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產(chǎn)氣莢膜梭菌、脆弱類(lèi)桿菌等也能液化明膠。另外多數假單胞菌也能液化明膠。
四、注意事項：
（1）如有的菌在20℃不生長(cháng)則在30℃培養生長(cháng)后，觀(guān)察時(shí)放冰箱或冷水中降溫，待對照管凝固后再記錄。
（2）滅菌過(guò)高或過(guò)低會(huì )影響結果，一般用116℃蒸汽滅菌15min較為合適。
五、常見(jiàn)問(wèn)題：
問(wèn)：明膠培養基放在37°培養了兩天后液態(tài)了,再放到4度冰箱里又變成固態(tài)了，網(wǎng)上說(shuō)30min后取出觀(guān)察是立即觀(guān)察還是要放室溫呀?
答：是立即觀(guān)察。傾斜試管看看表層是否有被液化的跡象，如果有液化則表層軟化出現流動(dòng)狀，如果不被液化則完全凝固。一般認為明膠的凝固點(diǎn)是24℃，不過(guò)各批次明膠差異很大，所以要放在冰箱后觀(guān)察。按你說(shuō)的放在4℃冰箱里又變成固態(tài)了，那就是還沒(méi)有出現明膠液化。不過(guò)這個(gè)實(shí)驗要培養7天的。
問(wèn)：明膠培養基放入培養箱會(huì )液化怎么回事？
答：兩種可能：（1）某些細菌可產(chǎn)生一種胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸，從而失去凝固力，半固體的明膠培養基成為流動(dòng)的液體；（2）明膠的熔點(diǎn)較低,如果放到37°或更高的溫度下，則明膠自身就容易液化，出現假陽(yáng)性結果。
問(wèn)：明膠液化溫度為24℃，其培養溫度一般為20℃，但是為什么明膠高層可以在36℃下培養，什么是明膠高層？
答：你所說(shuō)的“明膠高層”其實(shí)并不是一個(gè)詞語(yǔ)，應該分解為“明膠”和“高層”兩個(gè)詞語(yǔ)。意即：在營(yíng)養明膠培養基的高層，或者更明確的說(shuō)是上層。
這個(gè)是明膠液化試驗，是一種生理生化試驗，目的在于鑒定細菌。由于有些細菌具有明膠酶（亦稱(chēng)類(lèi)蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步水解為氨基酸，失去凝膠性質(zhì)而液化。
所謂的22℃或36℃其實(shí)是同一個(gè)試驗，只是接種后的培養溫度不同而已。用瓊脂培養物穿刺接種，然后放在22~25℃培養，每天觀(guān)察記錄液化時(shí)間�；蛘呤欠旁�36℃左右培養，每天取出，放在冰箱內30分鐘后再觀(guān)察結果。
之所以有這兩個(gè)溫度，是怕有些菌種在22-25℃下不易生長(cháng)，所以置于36℃培養。
問(wèn)：明膠液化實(shí)驗中明膠可以用瓊脂代替嗎？
答：不行。明膠和瓊脂性質(zhì)不同，對于這個(gè)實(shí)驗，可認為是完全不同的東西。
問(wèn)：做生理生化反應,配制明膠液化培養基：蛋白胨5個(gè)、葡萄糖20g、明膠200g,加水至1L，pH7.4，121度滅菌30分鐘，滅菌后水浴降溫，但仍為液體，配了2次了都不凝？
答：凝膠本質(zhì)是蛋白質(zhì)啊，這樣長(cháng)時(shí)間高溫滅菌，會(huì )使明膠水解，不再凝固! 該培養基通常采用116℃滅菌15分鐘。
相關(guān)產(chǎn)品：
明膠液化生化管（軍團菌）-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
