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一、試驗原理：
伊紅美蘭培養基（簡(jiǎn)稱(chēng)EMB medium）主要用于大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌的分離和鑒別。
其配方中各主要成分的作用為：蛋白胨提供碳源和氮源；乳糖是大腸菌群發(fā)酵的糖類(lèi)；磷酸氫二鉀是緩沖劑；瓊脂是培養基凝固劑；伊紅（Eosin Y）也稱(chēng)曙紅或四溴熒光素，為酸性染料，美蘭（eosin-methylene blue），也叫亞甲藍（C16H18N3S·Cl），為堿性染料，二者在培養基中均為指示劑。
當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)，細菌帶正電，所以染上紅色，再與美蘭結合而形成紫黑色菌落，并帶有金屬光澤；產(chǎn)氣腸桿菌則呈棕色，很少有金屬光澤。不分解乳糖的細菌，如沙門(mén)氏菌和志賀氏菌，則為無(wú)色或琥珀色半透明菌落；凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌為無(wú)色針尖大小的菌落；白色念珠菌則為蛛絲狀或羽毛狀菌落。
因該培養基抑制作用較弱，不宜用于腸道致病菌的分離。有資料稱(chēng)往該培養基中加入鹽酸金霉素，可以抑制大部分雜菌，以用于臨床尿、大便、口腔和陰道分泌物，指甲或皮膚屑中白色念珠菌的快速鑒定。還有報道稱(chēng)，本培養基可用于檢查凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌，其結果與凝固酶試驗相一致。
二、試驗操作方法
②用高溫滅菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1:10稀釋。
③取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養基上。用平板劃線(xiàn)分離法進(jìn)行分離。
④將劃線(xiàn)后的培養皿倒置37℃溫箱中培養18~24小時(shí)。培養基中會(huì )出現大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發(fā)金屬光澤。
⑤將菌落接種于斜面培養基上（由營(yíng)養瓊脂培養基制成）。
三、常見(jiàn)問(wèn)題
問(wèn)：GB/T 5750.12-2006標準中說(shuō)大腸菌群初發(fā)酵陽(yáng)性后，“將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上”，怎么轉種到伊紅美藍瓊脂平板上��？是先配好伊紅美藍傾倒在培養皿上，待瓊脂凝固后，劃線(xiàn)接種，還是先吸取1mL的發(fā)酵液注入到培養皿上，再傾倒15-20mL的瓊脂，待凝固后倒置培養，就像食品中菌落總數檢測方法那樣呢？
答：就是先配好伊紅美藍傾倒在培養皿上，待瓊脂凝固后，劃線(xiàn)接種，這樣可以看到典型菌落形態(tài)；然后找一些典型或可疑菌落做下一步驗證實(shí)驗就可以了。
問(wèn)： 那劃線(xiàn)接種所用的工具是接種環(huán)還是別的東西？以前沒(méi)實(shí)踐過(guò)平板劃線(xiàn)這個(gè)實(shí)驗，所以不太了解。另外標準上說(shuō)的菌落總數培養基是營(yíng)養瓊脂，用的和正常檢測食品的PCA計數平板是一個(gè)東西嗎？
答：接種用的是接種環(huán)。菌落總數用的營(yíng)養瓊脂和檢測食品的PCA差不多，但PCA的營(yíng)養成分還要高一些。
問(wèn)：我實(shí)驗條件有限，沒(méi)有乳糖和伊紅。乳糖能否用蔗糖代替？伊紅能否用紅墨水干了后的東西代替（我看見(jiàn)某網(wǎng)站上說(shuō)紅墨水用的是伊紅）？
答：常用的伊紅美藍乳糖培養基，可用來(lái)鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如果有大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。乳糖是一個(gè)半乳糖和一個(gè)葡萄糖構成，蔗糖是一個(gè)果糖和一個(gè)葡萄糖形成的。所以乳糖是必須的，因為牽涉到細菌產(chǎn)酸底物的特異性。
另外你用紅墨水，不怕里面的某些成分把細菌殺死嗎？并且墨水不一定是伊紅配成的，而且墨水成分也不僅僅是伊紅，如果你自行代替，至少我是不會(huì )承認你的實(shí)驗結果是有效的，因為你都說(shuō)不清楚培養基里到底有什么。
問(wèn)：培養基里的磷酸鹽是干嘛的？不加可以嗎？
答：磷酸氫鹽是作為pH緩沖劑添加的，如果培養時(shí)間不長(cháng)的話(huà)，不加也無(wú)妨。培養時(shí)間長(cháng)的話(huà)，大腸桿菌等細菌分解乳糖產(chǎn)酸導致pH下降，會(huì )抑制不耐酸細菌的生長(cháng)。
問(wèn)：請問(wèn)在做大腸菌群的檢測過(guò)程中，在配制伊紅美蘭瓊脂培養基時(shí)，乳糖、伊紅和美蘭溶液要滅菌嗎？
答：需要滅菌。
問(wèn)：顯色培養基，個(gè)人覺(jué)得還是買(mǎi)成品好！現在發(fā)現自己比較難配，而且試劑店的這種冷門(mén)試劑很多都是長(cháng)時(shí)間存放的，難免變質(zhì)，再說(shuō)個(gè)人每次用量太少，買(mǎi)一盒試劑又貴又用不完。要是有成品的這種培養基就好了！不知道哪里有賣(mài)的？能不能給推薦一下？
答：現在很多生物試劑都有成品，自己根本不用配。就拿EMB培養基來(lái)說(shuō)吧，我們青島海博生物計數公司就有好幾個(gè)產(chǎn)品類(lèi)型，有干粉、顆粒、甚至還有直接可以拿來(lái)用的倒好的無(wú)菌平板，都是針對不同用戶(hù)需求專(zhuān)門(mén)制作的。
問(wèn)：該產(chǎn)品可靠嗎？質(zhì)量怎么保證？
答：成品培養基出廠(chǎng)前都是經(jīng)過(guò)質(zhì)量檢測的。您要不放心也可以再自己做一下。
問(wèn)：能詳細介紹一下你們的EMB瓊脂平板這款產(chǎn)品嗎？
答：
【產(chǎn)品名稱(chēng)】伊紅美藍平板
【規格】90mm
【用途】供作腸道致病菌及大腸菌群的分離培養
【使用步驟】
1、復溫：取出培養基復溫至室溫；
2、接種：將需要接種的預稀釋好的標本或菌株用無(wú)菌移液管吸取一定量后移至平板，然后慢慢釋放，釋放的同時(shí)將移液管作“Z”字形移動(dòng)，或采用劃線(xiàn)、涂布、其它常用方法接種于培養基皆可；
3、培養：將接種好的培養基作好標識，置于35±2℃恒溫培養箱中培養24～48h后取出，觀(guān)察結果。
【預期結果】
根據菌落形態(tài)，做出相應的處理或報告。據檢驗目的不同，挑取無(wú)色菌落或挑選引線(xiàn)紅色及有金屬光澤的菌落轉種到克氏雙糖或三糖鐵瓊脂進(jìn)行鑒定。
【注意事項】
1、檢查平板內是否干裂或染菌，如上面有菌請勿使用；
2、請在潔凈的環(huán)境下操作，避免雜菌干擾；
3、培養時(shí)培養基平板應倒置于培養箱中，避免接觸培養箱壁和底部以致培養基過(guò)熱干縮；
4、拆封后未使用完的培養基要及時(shí)放到冰箱冷藏儲存，避免干裂；
5、在冰箱儲存很久的培養基容易出現一些冷凝水，請在潔凈的環(huán)境下將水倒出，然后在培養箱放置一段時(shí)間，待其表面干燥后再接種；
6、棄物處理：使用后應高壓滅菌或焚燒后方可按一般垃圾處理，也可按專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員指示方法處理。
【貯藏】2～8℃,避光儲存，拆封后及時(shí)放入冰箱冷藏
【有效期】3個(gè)月
【生產(chǎn)日期及批號】見(jiàn)標簽或外包裝
問(wèn)：這個(gè)方便多了，反正用的量也不是太多的！再問(wèn)一個(gè)問(wèn)題，為什么要把水樣和融化的培養基混合？不會(huì )使菌落數偏少嗎？
答：待測液是應該和培養基混合，俗稱(chēng)混平板法。當然，你選擇涂平板也沒(méi)有問(wèn)題�；炱桨宸〞�(huì )殺死不耐熱的細菌，平板法會(huì )對細菌造成機械損傷，各有利弊。
個(gè)人經(jīng)驗是一個(gè)9cm平板倒入培養基后吹干表面的水，加入500ul水樣反復傾斜平板使得水樣涂遍培養基，然后吹干即可。
相關(guān)產(chǎn)品：
伊紅美藍瓊脂(EMB)-點(diǎn)擊查看產(chǎn)品詳情
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
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