GB 4789.15-2016 變化及解讀

設備和材料章節

變化：將均質(zhì)器的名稱(chēng)具體為：拍擊式均質(zhì)器或均質(zhì)袋（2.2）

解讀：以前的版本都是采用震蕩的方法來(lái)進(jìn)行樣品表面的沖洗，均質(zhì)不夠，另外有些實(shí)驗室，使用的是旋轉刀均質(zhì)器，可能會(huì )把霉菌的菌絲切斷。所以本次修訂對均質(zhì)方式進(jìn)行了明確的規定。

變化：無(wú)菌試管規格由10mmX75mm修改為18mmX180mm（2.6）

解讀：規定成粗大的試管，有利于進(jìn)行樣品稀釋液的混勻，否則在小試管里面很難充分混勻。

變化：增加了微量移液器及槍頭1.0mL（2.11）

解讀：這是為了包容實(shí)際工作中常用的方式。實(shí)際上建議大家購買(mǎi)可整支高壓滅菌的移液器。

變化：刪除了無(wú)菌廣口瓶：500 mL

解讀：以前的標準還包括牛皮紙袋這一類(lèi)包裝材料，現在實(shí)驗室基本都不使用了。

變化：刪除了冰箱和恒溫震蕩器。增加了漩渦混合儀。增加了恒溫水浴

解讀：刪除了冰箱和恒溫震蕩器，因為標準沒(méi)有用到。增加了漩渦混合儀，主要是如果要求反復的吹吸樣品稀釋液，容易導致形成有害氣溶膠，并增加污染機會(huì )，用漩渦混合儀可以來(lái)保證樣品稀釋液的均勻，減少污染。增加了恒溫水浴，主要為了準確控制傾注瓊脂的溫度。

培養基和試劑章節

變化：增加了生理鹽水（A.1）：

生理鹽水：85g氯化鈉加入1000mL蒸餾水中，攪拌至完全溶解，分裝后，121℃滅菌15min，備用。

增加了磷酸鹽緩沖液（A.4）：

貯存液：稱(chēng)取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的１mol／L氫氧化鉀溶液調節pH至7.2±0.1，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。

稀釋液：取貯存液 1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。

解讀：增加兩種稀釋液也是為了方便大家的實(shí)驗室工作，因為經(jīng)常是同樣一份樣品，需要做菌落總數、大腸菌群和霉菌。另外重新稱(chēng)重換稀釋液的話(huà)，實(shí)驗室工作量太大了。

變化：修改了馬鈴薯葡萄糖瓊脂和孟加拉紅瓊脂配制的滅菌時(shí)間（A.2.2、A.3.2）

解讀：2010版中二者的滅菌時(shí)間均為20min，2016版將時(shí)間縮短為15min。太長(cháng)時(shí)間的高壓滅菌可能會(huì )破壞糖類(lèi)。

變化：修改了傾注平板的步驟（5.1.6）

解讀：2010版在傾注平板前，有用少量乙醇溶解氯霉素加入培養基中的步驟，在2016版中已將此部分內容刪除。氯霉素能夠耐高壓滅菌，所以直接加的培養基中再滅菌就方便了，以前的方法太繁瑣。 

檢驗程序和操作步驟章節-第一法

變化：2010版中只有無(wú)菌蒸餾水作為稀釋液，而在2016版中增加了生理鹽水及磷酸鹽緩沖液。（5.1.1）

解讀：增加兩種稀釋液也是為了方便大家的實(shí)驗室工作，因為經(jīng)常是同樣一份樣品，需要做菌落總數、大腸菌群和霉菌。另外重新稱(chēng)重換稀釋液的話(huà)，實(shí)驗室工作量太大了。

變化：將平皿中馬鈴薯葡萄糖瓊脂和孟加拉紅瓊脂培養基的使用量由15mL~20mL改為20mL~25mL。（5.1.6）

解讀：這是為了符合國標GB 4789.28-2013版對于培養時(shí)間超過(guò)48小時(shí)的培養基應傾注四毫米左右的厚度和二十毫升以上量的相應規定。

變化：增加了平板正置培養的規定

解讀：正置培養是避免在反復觀(guān)察的過(guò)程中，上下顛倒平板導致霉菌孢子擴散形成次生小菌落的一種手段。（5.2）

變化：霉菌蔓延生長(cháng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延（5.3）

解讀：上個(gè)版本原來(lái)對這樣的情況報告為多不可計，實(shí)際上當然是錯誤的。

結果和報告章節

變化：增加了兩種結果的計算方法：

若有兩個(gè)稀釋度平板上菌落數均在10CFU~150CFU之間，則按 GB 4789.2的公式進(jìn)行計算。（6.1.2）

若所有稀釋度的平板菌落數均不在10CFU~150CFU之間，其中一部分小于10CFU或大于150CFU時(shí)，則以最接近10CFU或150CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。（6.1.6）

增加了若空白對照平板上有菌落出現，則此次檢測結果無(wú)效的內容。（6.2.3）

解讀：這些的規定，都是參照了菌落總數的計數方法，對霉菌和酵母計數的最終報告方式進(jìn)行詳細的規定，以前版本的標準這方面有缺陷。

變化：菌落數在10以?xún)葧r(shí)，采用一位有效數字報告。（6.2.1）

解讀：上個(gè)版本，是菌落數在100以?xún)葧r(shí)，按照四舍五入原則修約，采用兩位有效數字報告�！�…按照這個(gè)規定，10以?xún)鹊木�落數�?huì )報告成8.5 

第二法--操作步驟章節

變化：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標準液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室，以備觀(guān)察。

解讀：這里的標準液，其實(shí)是樣品稀釋液。

依然未解決問(wèn)題匯總

本次新版標準，依然有三個(gè)技術(shù)問(wèn)題沒(méi)有解決：

第一個(gè)，就是沒(méi)有改變使用28℃培養，與美國FDA用較低溫度培養的技術(shù)差異問(wèn)題。

第二個(gè)，就是沒(méi)有明確如何區分霉菌和酵母菌落形態(tài)，又要求分別計數報告數量的問(wèn)題。

第三個(gè)，就是規定五天培養，但是實(shí)際上從第三天就應該開(kāi)始觀(guān)察并剔除那些已經(jīng)開(kāi)始蔓延的霉菌菌落。

期待未來(lái)新標準能有解決以上幾個(gè)問(wèn)題！

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