結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)培養基為選擇性計數固體培養基,主要用于大腸菌群平板計數檢驗。該培養基的配制及使用方法為:稱(chēng)取本品 41.5g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,煮沸不要超過(guò)2 分鐘。取適宜稀釋度樣品液 1ml,加入到無(wú)菌平皿中心,將冷至 45℃ ± 0.5℃ 的 VRBA 10-15ml傾注于平皿中。小心旋轉平皿將培養基與樣液充分混勻。凝固后,再加3-4ml VRBA 覆蓋平板表層 ,翻轉平板,置于36 ± 1℃培養 18-24 小時(shí)。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備,不得超過(guò)3小時(shí)。
VRBA的使用方法與其他培養基的不同之處在于:1、無(wú)需高壓滅菌,煮沸不超過(guò)2分鐘,必須現用現配。2、該培養基在傾注第一層凝固之后需要再用VRBA覆蓋一層,然后再進(jìn)行培養。
為什么每個(gè)平板上均要傾倒兩次結晶紫中性紅膽鹽培養基?主要是為了防止表面有遷徙性細菌生長(cháng),因為一旦有遷徙性菌落生長(cháng)蔓延,那這塊平板就很難能夠清楚的計數了。再倒一次瓊脂把可能存在的遷徙性菌落封在瓊脂內,讓其不能蔓延開(kāi)來(lái),這樣就不會(huì )對結果觀(guān)察造成影響了。所以再次傾倒可以防止菌落蔓延導致無(wú)法計數的現象發(fā)生。
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