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1、菌種活化：干粉標準菌株 標準貯備菌株 工作菌株；
1.1金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌標準菌株：挑取部分干粉溶解于0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板上，36℃±1℃培養18-24小時(shí)。并觀(guān)察菌落形態(tài)。
a.金黃色葡萄球菌：菌落凸起，圓形，不透明；b.大腸埃希氏菌：菌落稍凸，圓形，濕潤，乳白色；c.銅綠假單胞菌：菌落扁平，圓形，邊緣不整齊，光滑濕潤，可產(chǎn)生藍綠或黃綠色素；d. 枯草芽孢桿菌:表面粗糙不透明，鏡檢菌體有芽孢。
1.2白色念珠菌：挑取部分干粉溶解于0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，劃線(xiàn)接種于改良馬丁瓊脂培養基平板或PDA瓊脂平板上，30℃-35℃培養24-48小時(shí)。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽(yáng)性，但著(zhù)色不均勻。
黑曲霉：挑取部分干粉溶解于0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，劃線(xiàn)接種于改良馬丁瓊脂斜面培養基上，23℃-28℃培養48-96小時(shí)。菌叢呈黑褐色，粗糙。
1.3生孢梭菌：挑取部分干粉溶解于0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，接種于硫乙醇酸鹽流體培養基中，30℃～35℃培養18-24小時(shí)；或在厭氧條件下接種于哥倫比亞瓊脂上，30℃～35℃厭氧培養18-24小時(shí)。
2、菌種鑒定：
2.1金黃色葡萄球菌：
革蘭氏染色試驗：革蘭氏陽(yáng)性菌(紫色)，葡萄狀排列，球菌。
兔血漿試驗：接種1個(gè)單菌落于1支兔血漿溶液中，30℃-35℃培養至6小時(shí)，每半小時(shí)觀(guān)察一次。凝固為陽(yáng)性。金黃色葡萄球菌為陽(yáng)性反應。
2.2大腸埃希氏菌：
革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。
IMVC生化試驗：
2.3銅綠假單胞菌：
革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。
氧化酶試驗：將氧化酶試紙用蒸餾水浸濕，用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個(gè)菌落，涂在試紙上。在60s內變?yōu)樗{色或藍紫色為陽(yáng)性，不變色為陰性。
綠膿菌素試驗：取斜面培養物接種于PDP瓊脂培養基斜面上，培養24小時(shí)，加三氯甲烷3～5ml至培養管中，攪碎培養基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸試液約1ml，振搖后，靜置片刻，觀(guān)察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗陽(yáng)性，否則為陰性。本菌為綠膿菌素試驗陽(yáng)性。
熒光試驗：接種于金氏B培養基(或假單胞菌產(chǎn)熒光色素培養基)上，36℃±1℃培養18-24小時(shí)，在366nm紫色燈下有藍綠色熒光。
2.4枯草芽孢桿菌：
菌落形態(tài)：表面粗糙不透明，有皺摺。
鏡檢：用芽孢染色液染色，菌體有芽孢。
2.5白色念珠菌：
革蘭氏染色試驗：呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽(yáng)性，但著(zhù)色不均勻。
念球菌顯色培養基：30-35℃培養24-48小時(shí)，呈綠色菌落。
產(chǎn)芽管試驗：挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養基上的培養物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤的平皿內，置35～37℃、1～3小時(shí)，置顯微鏡下觀(guān)察，可見(jiàn)到由孢子長(cháng)出短小芽管。
2.6黑曲霉：23℃-28℃培養48-96小時(shí)。菌叢呈黑褐色，粗糙，有黑色孢子產(chǎn)生。
2.7生孢梭菌：
革蘭氏染色試驗：革蘭陽(yáng)性梭菌，有或無(wú)卵圓形或球形的芽孢。
哥倫比亞瓊脂培養基試驗：接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上，置厭氧條件下培養48～72小時(shí)，應生長(cháng)。
過(guò)氧化氫酶試驗：滴加3%過(guò)氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產(chǎn)生，為過(guò)氧化氫酶試驗陽(yáng)性，否則為陰性。本菌為陰性反應。
3、需購買(mǎi)試劑：
注：本文屬海博生物原創(chuàng )，未經(jīng)允許不得轉載。
